[發明專利]外泌體中microRNA在評估腦膠質瘤放療效果中的用途

在審

• 申請號: 201910750914.2
• 申請日: 2019-08-14
• 公開（公告）號: CN110616262A
• 公開（公告）日: 2019-12-27
• 發明（設計）人: 李子煌;鄒暢;周略
• 申請（專利權）人: 深圳市人民醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886
• 代理公司: 11597 北京睿派知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 劉鋒

本發明公開了一種檢測外泌體中microRNA的試劑在制備評判腦膠質瘤的損傷程度的產品中的用途。該方法采用高分子聚合物沉淀血清中的外泌體，本發明的方法采用高分子聚合物沉淀血清中的外泌體，實時熒光定量聚合酶鏈式反應(PCR)技術分析放療前和放療后腦膠質瘤患者血清外泌體中的RNA miR?208b、miR?873?5p和miR?6731的表達和差異，放療后腦膠質瘤患者外周血內的miR?208b、miR?873?5p和miR?6731的表達顯著升高。同時，與放療預后效果較差且出現復發的患者相比，放療后病情穩定一年內暫未出現復發的患者血清外泌體的miR?208b、miR?873?5p和miR?6731表達顯著升高。因此可作為評估放療效果的標志物。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及外泌體中microRNA在評估腦膠質瘤放療效果中的用途。

背景技術

腦膠質瘤是是神經系統最常見的原發性腫瘤，由大腦和脊髓膠質細胞癌變所產生的，起源于外胚層，約占顱內原發性腫瘤的50％以上。在所有新發腫瘤中，膠質瘤占1.4％，而死于膠質瘤的患者占所有腫瘤死亡患者的2.4％，其特點為生長迅速、侵襲性強、手術后易復發、預后差、根治困難，病死率高。因此，腦膠質瘤嚴重威脅患者生命健康，已成為一個突出的公共衛生難題。

目前放療和化療是惡行腫瘤治療的常規方法。在放療中，電離輻射能夠局部照射腫瘤，產生氧自由基使DNA鏈發生斷裂，引起癌細胞凋亡，實現腫瘤病灶的局部控制。因此放射治療，既提高局部控制率又降低轉移風險。但膠質瘤放療中因不知周圍組織是否能夠很好地耐受放療而受到限制。此外接受有效放療劑量治療的病人遭受不同程度的學習和記憶喪失，從而對他們的生活質量產生負面影響。腦膠質瘤的治療效果差強人意，一是膠質瘤的特點所決定，二是因為血腦屏障的阻擋過濾原因，尤其是血腦屏障沒有破壞的腫瘤區域，這使得傳統的治療方法難以有較好療效，術后復發率高。因此迫切需要聯合新的治療方法不僅能夠增強膠質瘤治療效果，還能對膠質瘤患者的放療效果進行早期檢測和實時監控，以及評價治療后的效果。

外泌體攜帶的內容物可穿越血腦屏障。有研究學者提出，在腫瘤微環境中，腫瘤細胞利用外泌體進行細胞間通訊，對其他細胞進行重編程，導致腫瘤相關的病理學指標的出現，例如血管生成、免疫逃避/調節、細胞命運改變和轉移。外泌體是一種由細胞分泌，大小為30～100nm的小囊泡，其內含有脂質、蛋白質、mRNA、miRNA等生物活性物質，可通過與靶細胞受體結合或水平傳遞生物活性物質而發揮生物學功能。研究發現，它們能夠調節宿主-病原體的相互作用，參與傳染性和炎性疾病、神經疾病和癌癥等很多種疾病的病理過程，同時在正常的生理過程中也發揮著介導細胞間通訊的重要功能[3]。外泌體在臨床醫學中也有十分光明的應用前景，主要是因為它們含有豐富的生物標志物，可用于監測臨床狀態，治療反應，疾病進展等，同時由于它們具有遞送生物分子的功能，因此它們還有發展成臨床藥物遞送載體的潛力。

microRNA是一種內源性的22個核苷酸的小分子單鏈RNA，通過靶向mRNA的3’UTR降解mRNA，或抑制其翻譯從而實現對基因表達的調節。最近研究發現，急性腦梗死患者或腦缺血損傷動物模型血液中的microRNA表達顯著變化，如腦缺血和動脈粥樣硬化患者血清中let-7e、miR-21和miR-145的水平增高，而miR-221和miR-210則顯著降低，因此認為它們可以作為腦梗死早期診斷的血液標志物。但它們缺乏組織特異性，miRNA-145是主要分布在血管平滑肌細胞而miRNA-210則是氧敏感性microRNA。

外泌體中包含的miRNA可反映分泌細胞的生理、病理及功能狀態。miRNA是一組數量龐大的非編碼微小RNA，通過與靶mRNA的3'非翻譯區(3'-UTR)中的互補序列結合，在轉錄后或翻譯水平上抑制了近1/3的人類基因。據報道，miRNA介導許多生物過程，包括腫瘤發生，已經有幾種miRNA被鑒定為膠質瘤中的原癌miRNA或腫瘤抑制因子。這些miRNA 伴隨著它們的靶基因共同調節神經膠質瘤的病理學和生理學的復雜網絡。目前已有研究表明外泌體內的miRNA作為非侵入性生物標志物用于預測某些癌癥的放療反應性。

發明內容