[發明專利]一種醒腦靜注射液腦組織中冰片與麝香酮含量測定方法

在審

• 申請號: 201910746665.X
• 申請日: 2019-08-14
• 公開（公告）號: CN110470757A
• 公開（公告）日: 2019-11-19
• 發明（設計）人: 甘國峰;閔江;於江華
• 申請（專利權）人: 無錫濟民可信山禾藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 11130 北京華科聯合專利事務所(普通合伙)
• 代理人: 王為;孟旭<國際申請>=<國際公布>=<

1.一種腦組織中的冰片與麝香酮含量測定方法，所述方法采用氣質聯用色譜法，其特征在于，所述方法，步驟如下：

醒腦靜給與哺乳動物體內，隨后取腦，取腦后60分鐘內，加入生理鹽水，勻漿得到腦勻漿，加入含萘的內標溶液，充分渦旋，放入-20±5℃冰箱過夜萃取，室溫融化，充分渦旋，離心，取上清，過濾后，注入氣質聯用色譜儀，得到色譜圖，根據色譜圖，用標準曲線法計算大鼠腦組織中冰片與麝香酮的含量。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，，所述方法，步驟如下：

醒腦靜給與哺乳動物體內，隨后取腦，用生理鹽水沖洗表面，然后用濾紙濾干，使用前放置在濕冰或5±3℃條件下，取腦后60分鐘內，按一倍質量的腦加入1.5倍體積的生理鹽水，勻漿得到腦勻漿，每495ul腦勻漿加入500μL含內標萘的溶液，充分渦旋，放入-20±5℃冰箱過夜萃取，室溫融化，充分渦旋，在4℃，20000g離心條件下離心20分鐘，取250μL上清，過濾后，注入氣質聯用色譜儀，得到色譜圖，根據色譜圖，用標準曲線法計算大鼠腦組織中冰片與麝香酮的含量；其中所述氣質聯用色譜儀采用以下色譜條件：

氣質聯用色譜儀色譜系統條件：氣相色譜：安捷倫7890A，色譜柱：島津Rtx-Wax，30m，0.25 ID，0.25um(RT-12423)，程序升溫條件：初始溫度150℃，15℃/min升溫至250℃，維持5min。進樣口溫度：250℃，載氣：高純氦氣，流速：2mL/min，壓力：19.4psi，自動進樣器：安捷倫7693；

自動進樣器溫度：室溫，

保留時間：待測物 內標

冰片＝～5.3分鐘 萘＝～5.6分鐘

麝香酮＝～9.2分鐘

運行時間：12.83min

進樣量：1μL

質譜儀：7000QQQ-MS

離子化模式：電子電離

極性：正離子

監測模式：MRM

離子源溫度：230℃

碰撞氣：高純氮氣

EMV：2386或2441

離子對和參數：

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述標準曲線法中的標準曲線的制備方法如下：以冰片和麝香酮作為對照品，配制成已知的不同濃度的對照品溶液，按照氣質聯用色譜儀色譜系統條件進行檢測，得到色譜圖，根據色譜圖峰面積和不同對照品溶液對應的濃度，得到不同含量的冰片和麝香酮的標準曲線。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于所述內標溶液，是用乙酸乙酯稀釋的600ng/mL萘的內標溶液。

5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，其中，冰片，麝香酮以及內標的峰面積和/或峰高由QQQ Quantitative Analysis軟件獲得，并用標準樣品建立標準曲線。

6.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，其中，利用QQQ Quantitative Analysis軟件對待測物/內標的峰面積比與待測物的濃度進行線性回歸得到標準曲線。

7.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，其中，得到色譜圖后，進行數據處理，方法如下：待測樣品濃度由QQQ Quantitative Analysis軟件經線性方程式來確定。其他實驗數據的統計分析利用Microsoft Excel軟件計算。

8.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，還包括測定空白液以作為對照，所述空白液的制備方法如下：

一倍質量的空白大鼠腦加入1.5倍體積的生理鹽水中，勻漿得到空白腦勻漿，冷凍保存在-80±5℃的冰箱內，向已加有5μL工作溶液和空白腦勻漿的離心管中加入含內標的乙酸乙酯，充分渦旋，放入-20±5℃冰箱過夜萃取，室溫融化，充分渦旋，在4℃，20000g離心條件下離心20分鐘，取上清過濾即得。