[發(fā)明專利]一種維生素B12的發(fā)酵法生產(chǎn)方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910746320.4
• 申請日: 2019-08-13
• 公開（公告）號(hào): CN110358797A
• 公開（公告）日: 2019-10-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 南京牧奇亞生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12P19/42
• 分類號(hào): C12P19/42;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 北京久維律師事務(wù)所 11582
• 代理人: 邢江峰

本發(fā)明公開了一種維生素B12的發(fā)酵法生產(chǎn)方法，其包括如下步驟：步驟1)制備謝氏丙酸桿菌液；步驟2)制備懸浮發(fā)酵菌落；步驟3)制備發(fā)酵培養(yǎng)基；步驟4)混合懸浮發(fā)酵菌落與發(fā)酵培養(yǎng)基；步驟5)厭氧發(fā)酵生產(chǎn)維生素B12；步驟5)離心洗滌過濾懸浮載體；步驟6)提取和純化；本發(fā)明創(chuàng)造性地使用懸浮生物填料技術(shù)，用于謝氏丙酸桿菌的附著，使其在發(fā)酵培養(yǎng)基中懸浮，與發(fā)酵培養(yǎng)基中的營養(yǎng)液充分接觸，大大提高賴氨酸的生產(chǎn)效率，由于發(fā)酵溫度相對(duì)較低，懸浮生物填料不會(huì)受溫度影響而產(chǎn)生有害物質(zhì)進(jìn)入發(fā)酵液中，保證了維生素B12的生產(chǎn)安全性；2.本發(fā)明進(jìn)一步利用超聲處理和酶處理進(jìn)一步提高發(fā)酵培養(yǎng)基均勻性和一致性，提高謝氏丙酸桿菌的生產(chǎn)效率。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及維生素B12生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種維生素B12的發(fā)酵法生產(chǎn)方法。

背景技術(shù)

維生素B12(Vitamin B12)為B族維生素之一，是一類含鈷的復(fù)雜有機(jī)化合物。分子結(jié)構(gòu)是以鈷離子為中心的咕啉環(huán)和5,6-二甲基苯并咪唑?yàn)閴A基組成的核苷酸。

維生素B12又稱鈷胺素或氰鈷素，是一種重要的動(dòng)物和人類營養(yǎng)因子，廣泛應(yīng)用于飼料、食品和醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域，其在很多方面都有顯著作用，如促進(jìn)紅細(xì)胞的發(fā)育和成熟，預(yù)防惡性貧血；維護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)健康；以輔酶的形式存在，可以增加葉酸的利用率，促進(jìn)碳水化合物、脂肪和蛋白質(zhì)的代謝；也可促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，對(duì)嬰幼兒的生長發(fā)育有重要作用；還能消除煩躁不安、集中注意力、增強(qiáng)記憶及平衡感，而且維生素B12參與神經(jīng)組織中一種脂蛋白的形成，是神經(jīng)系統(tǒng)功能健全不可缺少的維生素。

采用化學(xué)合成生產(chǎn)維生素B12的方法成本高，副產(chǎn)物多，難以提純。維生素B12的工業(yè)制造主要是通過微生物發(fā)酵法制得，應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)的菌株主要有厭氧費(fèi)氏丙酸桿菌、謝氏丙酸桿菌及耗氧的脫單假單孢桿菌。通過厭氧發(fā)酵生產(chǎn)維生素B12的產(chǎn)率較低，究其原因，產(chǎn)維生素B12菌株與培養(yǎng)液混合后極易附著在發(fā)酵罐的側(cè)壁上，從而與發(fā)酵培養(yǎng)基的營養(yǎng)液不充分接觸，導(dǎo)致產(chǎn)維生素B12菌株的生產(chǎn)效率低，因此，急需研究一種維生素B12的發(fā)酵法生產(chǎn)方法，提高維生素B12的生產(chǎn)效率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種維生素B12的發(fā)酵法生產(chǎn)方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種維生素B12的發(fā)酵法生產(chǎn)方法，該方法包括如下步驟：

步驟1)制備謝氏丙酸桿菌液；

步驟2)制備懸浮發(fā)酵菌落；

步驟3)制備發(fā)酵培養(yǎng)基；

步驟4)混合懸浮發(fā)酵菌落與發(fā)酵培養(yǎng)基；

步驟5)厭氧發(fā)酵生產(chǎn)維生素B12；

步驟5)離心洗滌過濾懸浮載體；

步驟6)提取和純化。

優(yōu)選的，所述步驟1)制備謝氏丙酸桿菌液，包括如下步驟：將謝氏丙酸桿菌液接入菌液培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至密度為(3-5)10⁸cfu/mL的菌液；所述菌液培養(yǎng)基的組分為:葡萄糖80g/L，酵母膏30g/L，玉米漿10g/L，磷酸二氫鉀2g/L，磷酸氫二鉀2g/L，七水硫酸亞鐵0.2g/L，七水硫酸鎂0.2g/L，生物素10mg/L，維生素B₁ 2mg/L。

優(yōu)選的，所述步驟2)制備懸浮發(fā)酵菌落，包括如下步驟：將懸浮生物填料添加至所述的謝氏丙酸桿菌液中，讓謝氏丙酸桿菌附著在所述的懸浮生物填料上，形成懸浮發(fā)酵菌落。