[發(fā)明專利]誘導(dǎo)體細胞轉(zhuǎn)分化為感覺神經(jīng)元及神經(jīng)節(jié)的組合物與方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910745280.1 | 申請日： | 2019-08-13 |
| 公開（公告）號： | CN110468104B | 公開（公告）日： | 2023-07-04 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 向孟清;晉康新;鄒珉;肖冬長 | 申請（專利權(quán)）人： | 向孟清;晉康新;鄒珉;肖冬長 |
| 主分類號： | C12N5/079 | 分類號： | C12N5/079;C12N5/0793;C12N5/073;C12N15/867;C12N5/10 |
| 代理公司： | 廣州凱東知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44259 | 代理人： | 李俊康 |
| 地址： | 廣東省廣州市天河*** | 國省代碼： | 暫無信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 誘導(dǎo) 體細胞 化為 感覺 神經(jīng)元 神經(jīng)節(jié) 組合 方法 | ||
1.誘導(dǎo)成纖維細胞轉(zhuǎn)分化為感覺神經(jīng)元的組合物，其特征在于：
活性成分選自攜帶有Ascl1+Isl1的病毒顆粒，所述病毒顆粒的載體選自慢病毒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)成纖維細胞轉(zhuǎn)分化為感覺神經(jīng)元的組合物，其特征在于：
所述攜帶有Ascl1+Isl1的病毒顆粒是指攜帶有Ascl1的病毒顆粒與攜帶有Isl1的病毒顆粒的混合物，和/或同時攜帶有Ascl1、Isl1的病毒顆粒。
3.一種如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征在于：
所述組合物制備步驟如下：
1)構(gòu)建病毒載體：把組合轉(zhuǎn)錄因子編碼序列克隆進入病毒顆粒的載體，構(gòu)建轉(zhuǎn)染用的質(zhì)粒；
2)制備病毒：培養(yǎng)病毒包裝細胞，把步驟1)制備的質(zhì)粒，連同病毒包裝質(zhì)粒一起利用脂質(zhì)體或者電轉(zhuǎn)或者氯化鈣或者磷酸鈣轉(zhuǎn)染病毒包裝細胞，進行培養(yǎng)；
3)從培養(yǎng)液或/和病毒包裝細胞中收集病毒顆粒，得到攜帶組合轉(zhuǎn)錄因子的病毒顆粒。
4.一種使用如權(quán)利要求1所述的組合物體外誘導(dǎo)成纖維細胞轉(zhuǎn)分化為感覺神經(jīng)元的方法，其特征在于：
包括如下步驟：
(1)采集和擴增成纖維細胞；
(2)把組合物感染成纖維細胞，使成纖維細胞內(nèi)過表達組合轉(zhuǎn)錄因子：Ascl1+Isl1；
(3)培養(yǎng)轉(zhuǎn)染后的成纖維細胞，期間成纖維細胞轉(zhuǎn)分化為感覺神經(jīng)元。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的誘導(dǎo)成纖維細胞轉(zhuǎn)分化為感覺神經(jīng)元的方法，其特征在于：
所述步驟(2)的過程是：
把成纖維細胞與培養(yǎng)基加入poly-l-ornithine和laminin包被的培養(yǎng)皿中培養(yǎng)；移除培養(yǎng)基，按比例加入組合物轉(zhuǎn)染成纖維細胞。
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