[發(fā)明專利]基于pgk基因的重組乳酸乳球菌和無乳鏈球菌病疫苗

在審

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• 申請日: 2019-08-09
• 公開（公告）號: CN110669711A
• 公開（公告）日: 2020-01-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賴迎迢;石存斌;陶家發(fā);袁玉梅;孫承文;鞏華
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院珠江水產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/54;A61K39/09;A61P31/04;C12R1/01
• 代理公司: 11689 北京智繪未來專利代理事務(wù)所(普通合伙)
• 代理人: 郭紅燕

一種基于pgk基因的重組乳酸乳球菌，其包含無乳鏈球菌的pgk基因，所述pgk基因通過質(zhì)粒載體被導(dǎo)入到乳酸乳球菌。所述pgk基因具有由SEQ No.1所示的DNA序列。所述質(zhì)粒載體是pNZ8148載體。所述乳酸乳球菌是乳酸乳球菌NZ9000。本發(fā)明還提供一種羅非魚無乳鏈球菌病疫苗，其包括上述的重組乳酸乳球菌，所述重組乳酸乳球菌是在存在乳酸鏈球菌素的條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)后的重組乳酸乳球菌。所述疫苗是口服灌胃給藥的疫苗。所述羅非魚無乳鏈球菌病疫苗包括濃度為2×10¹⁰cfu·mL^?1的所述重組乳酸乳球菌。所述疫苗的給藥劑量是200μL。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于水生生物疾病防控的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及基于pgk基因的重組乳酸乳球菌和包含該重組乳酸乳球菌的無乳鏈球菌病疫苗。

背景技術(shù)

羅非魚(Oreochromis sp.)是我國南方主要養(yǎng)殖魚類之一，有食性雜、適應(yīng)性廣、繁殖能力強(qiáng)、生長速度快等優(yōu)點(diǎn)。近年來，羅非魚病害的爆發(fā)對羅非魚產(chǎn)業(yè)造成巨大的損失，而且趨勢越發(fā)嚴(yán)重，阻礙了羅非魚產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。羅非魚病害的主要病原有海豚鏈球菌(Streptococcus iniae)和無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)，其中90％以上的臨床菌株為無乳鏈球菌。

羅非魚無乳鏈球菌病發(fā)生的主要原因有養(yǎng)殖水質(zhì)差、養(yǎng)殖密度大、使用低質(zhì)飼料等。該病的防治方法主要有藥物、生態(tài)和免疫防治。化學(xué)藥物防治是最直接、便捷方便的防控手段，但是長期使用化學(xué)藥品容易產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致藥物殘留引起質(zhì)量安全問題。

疫苗具有無殘留、不易引起耐藥性、安全高效等優(yōu)點(diǎn)，可替代化學(xué)類藥物作為羅非魚鏈球菌病防控的重要途徑，是羅非魚病害防控的發(fā)展趨勢。相較于其他的免疫方式，口服疫苗使用更為方便，具有不受養(yǎng)殖時(shí)間、地點(diǎn)和受體大小的限制，對魚體無損傷等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

一方面，本發(fā)明的目的在于提供一種基于pgk基因的重組乳酸乳球菌，其包含無乳鏈球菌的pgk基因，所述pgk基因通過質(zhì)粒載體被導(dǎo)入到乳酸乳球菌。

優(yōu)選地，所述pgk基因具有由SEQ No.1所示的DNA序列。

優(yōu)選地，所述質(zhì)粒載體是pNZ8148載體。

優(yōu)選地，所述乳酸乳球菌是乳酸乳球菌NZ9000。

優(yōu)選地，所述重組乳酸乳球菌在存在乳酸菌肽的培養(yǎng)條件下能誘導(dǎo)表達(dá)分子量大小為44kDa的Pgk蛋白，所述重組乳酸乳球菌于2019年7月22日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號是CCTCC M 2019575 NZ9000 pNZ8148-pgk Lactococcus lactis。

另一方面，本發(fā)明還提供一種羅非魚無乳鏈球菌病疫苗，其包括上述的重組乳酸乳球菌。

優(yōu)選地，所述重組乳酸乳球菌是在存在乳酸鏈球菌素的條件下誘導(dǎo)培養(yǎng)后的重組乳酸乳球菌。

優(yōu)選地，所述羅非魚無乳鏈球菌病疫苗疫苗是口服灌胃給藥的疫苗。

優(yōu)選地，所述羅非魚無乳鏈球菌病疫苗包括濃度為2×10¹⁰cfu·mL^-1的所述重組乳酸乳球菌，給藥劑量優(yōu)選是200μL。

本發(fā)明所提供的基于pgk基因的重組乳酸乳球菌以及利用重組乳酸乳球菌制備的疫苗能顯著地提高羅非魚血清的抗體水平，對羅非魚的免疫保護(hù)效果優(yōu)異，尤其是經(jīng)三次口服灌胃免疫后的保護(hù)效果更優(yōu)。這種口服灌胃疫苗更適用于羅非魚養(yǎng)殖實(shí)踐應(yīng)用，可減少疫苗免疫的工作量，提高養(yǎng)殖戶使用疫苗的便利程度。

附圖說明

圖1是pgk擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果。

圖2是pNZ8148經(jīng)NcoI和HindIII雙酶切后的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果。