[發明專利]一種捕獲核酸分子的方法及其應用

在審

• 申請號: 201910733022.1
• 申請日: 2019-08-09
• 公開（公告）號: CN112342269A
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發明（設計）人: 李改玲;甘廣麗;李妍;駱明杰;張萌;孫雷
• 申請（專利權）人: 深圳市真邁生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C12Q1/6869;C12N15/10;C40B50/06
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• 代理人: 暫無信息

1.一種捕獲核酸分子的方法，其特征在于，所述核酸分子包括互補的第一核酸鏈和第二核酸鏈，所述核酸分子具有至少一個單鏈末端，至少一個所述單鏈末端位于所述第一核酸鏈上，該方法包括：

利用探針捕獲所述核酸分子，使所述探針和所述第一核酸鏈上的至少一部分互補結合，以獲得雜交復合體，所述第一核酸鏈上的至少一部分包含所述單鏈末端。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述單鏈末端位于所述第一核酸鏈的3’端；

任選地，所述探針為寡核苷酸單鏈；

任選地，所述探針的長度為20～80nt；

任選地，所述探針的3’末端的核苷酸含有羥基；

任選地，所述探針固定在固體介質上，所述固體介質選自玻璃、塑料和磁珠中的至少一種。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述核酸分子通過連接第一核酸片段和第二核酸片段而獲得，所述第一核酸片段和所述第二核酸片段均為雙鏈DNA，所述第一核酸片段為已知序列，所述第一核酸片段包括互補的第一鏈和第二鏈，所述單鏈末端位于所述第一鏈上；

任選地，所述第一核酸片段和所述第二核酸片段通過平末端連接和/或粘性末端連接以獲得所述核酸分子；

任選地，所述第一鏈的5'端具有磷酸基團；

任選地，所述第二鏈的3’端無羥基。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，80℃≥(Tm1-Tm2)≥10℃并且90℃≥Tm1≥50℃，Tm1為所述第一鏈的溶解溫度，Tm2為所述第二鏈的溶解溫度；

任選地，所述第一鏈的所有序列與探針互補配對；

任選地，所述Tm1為71℃，Tm2＝45.6℃；

任選地，Tm2-5℃≤T≤Tm1-5℃，T為進行所述捕獲的溫度；

任選地，所述第一鏈的3’端帶有光學可檢測標記；任選地，所述光學可檢測標記為熒光分子。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法還包括在進行所述捕獲之前，使所述核酸分子解鏈為單鏈核酸分子。

6.一種雜交復合體，其特征在于，所述的雜交復合體通過權利要求1-5任一所述的方法獲得。

7.一種試劑盒，包括權利要求1-5任一所述的核酸分子。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包含所述探針；

任選地，所述試劑盒還包括所述雜交復合體。

9.權利要求7或8所述的試劑盒在序列雜交捕獲和/或測序中的用途。

10.一種測序方法，其特征在于，包括對雜交復合體進行序列測定，所述雜交復合體利用權利要求1-5任一所述的方法獲得。