[發明專利]墨西哥灣扇貝微衛星標記的特異引物及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201910732693.6
• 申請日: 2019-08-09
• 公開（公告）號: CN110551825B
• 公開（公告）日: 2023-10-17
• 發明（設計）人: 潘英;鄭宇辰;吳雪萍
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11;C12Q1/6806;G16B20/00;G16B5/00
• 代理公司: 南寧啟創知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 45122
• 代理人: 經國富

墨西哥灣扇貝微衛星標記的特異引物及其構建方法和應用，針對現階段培育墨西哥灣扇貝存在的問題，運用磁珠富集法篩選墨西哥灣扇貝微衛星分子標記，并利用微衛星標記對墨西哥灣扇貝的遺傳多樣性進行評價；由測序得到的微衛星序列設計并獲得了20對能夠在墨西哥灣扇貝基因組有效擴增且具有多態性的微衛星引物。本發明有助于了解墨西哥灣扇貝的遺傳特征，為墨西哥灣扇貝種質資源改良提供相關的遺傳背景資料和理論依據。

技術領域

本發明屬于分子生物學DNA標記技術領域，尤其涉及墨西哥灣扇貝微衛星標記的特異引物及其構建方法和應用。

背景技術

墨西哥灣扇貝原產于美國，主要分布在美國東部大西洋沿岸新澤西州至佛羅里達州之間的海域，由于其雙殼比海灣扇貝更加膨凸，出柱率高于海灣扇貝。與海灣扇貝相比，墨西哥灣扇貝具有出肉率高、出柱率高、生長快、適合在中國南方海域養殖等特點。尤其是養殖周期較短，能夠避開臺風以減少損失，受到業界青睞。至2014年，其養殖面積已超過6600hm²，成為北部灣海域貝類養殖的重要產業。但是墨西哥灣扇貝引種至今已近30年，隨著養殖世代的增加，加上近交和瓶頸效應，該品種出現了抗逆性降低、生長速度減慢、個體小型化、死亡率升高等一系列問題，養殖效益嚴重下滑。

微衛星DNA(Microsatellite DNA)，又稱簡單重復序列(Simple SequenceRepeats，SSR)，是目前應用最為廣泛的分子標記之一，其核心重復序列一般為1-6個堿基，如(CA)_n、(GT)_n、 (CAG)_n、(AGCT)_n等，首尾相連組成的串聯重復序列，長度一般在100bp以內。微衛星標記在家系建立、減少或避免近交衰退，個體識別和親緣關系鑒定等工作中具有重要作用。

申請號為201410750857.5中國專利，其公開了14個管角螺微衛星位點及其引物，所獲引物的擴增結果具有高度的多態性和穩定性，用于管角螺的種群遺傳多樣性檢測、個體鑒定或分子輔助育種方法；但是沒有給出具體的應用方法和應用結果分析。

現階段，尚無一種對墨西哥扇貝的系統性遺傳特征分析方法，為解決該品種容易出現的抗逆性降低、生長速度減慢、個體小型化、死亡率升高等一系列問題，養殖效益嚴重下滑，因此對墨西哥灣扇貝進行種質資源改良已經迫在眉睫，為進一步了解墨西哥灣扇貝養殖群體的遺傳特征，為墨西哥灣扇貝種質資源改良提供相關的遺傳背景資料和理論依據，對墨西哥灣扇貝進行微衛星標記、遺傳信息的有效分析十分迫切。

發明內容

為解決上述問題，本發明提供墨西哥灣扇貝微衛星標記的特異引物及其構建方法和應用，針對墨西哥灣扇貝出現的養殖問題，開發篩選出微衛星分子標記，并利用微衛星標記分析墨西哥灣扇貝的遺傳多樣性，為了解墨西哥灣扇貝養殖群體的遺傳特征、墨西哥灣扇貝種質資源改良提供相關的遺傳背景資料和理論依據。

為此本發明采用以下技術方案：

一種墨西哥灣扇貝微衛星標記的特異引物，墨西哥灣扇貝的多態性微衛星位點序號、及用于擴增所述墨西哥灣扇貝微衛星位點的特異引物對包括如下20個中的任一個，其的特征如下：

進一步的，所述墨西哥灣扇貝微衛星位點在基因庫中對應的編號位置如下：

本發明提供一種墨西哥灣扇貝微衛星標記的構建方法，微衛星位點的篩選方法包括如下步驟：

(1)提取墨西哥灣扇貝的基因組DNA；

(2)以步驟(1)所述DNA為模板DNA，將所述模板DNA進行酶切，得到酶切DNA 片段；