[發明專利]一種多黏菌素E組分及其光化學產物和液相色譜-質譜分析方法

有效

• 申請號: 201910731659.7
• 申請日: 2019-08-08
• 公開（公告）號: CN110845579B
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發明（設計）人: 張含智;劉浩;秦峰;聞宏亮;裘亞;趙敬丹
• 申請（專利權）人: 上海市食品藥品檢驗研究院
• 主分類號: C07K7/62
• 分類號: C07K7/62;G01N33/68
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 車超平

本發明公開了一種多黏菌素E(Polymyxin E，PME)組分及其光化學產物和液相色譜?質譜分析方法；其中，該多黏菌素E組分包括多黏菌素E雙鍵化組分，具體為包括多黏菌素E1雙鍵化組分、多黏菌素E2雙鍵化組分，該類組分經高效液相色譜?質譜(HPLC?MS)及二級質譜分析驗證雙鍵位于N?脂肪酰基鏈末端。所述雙鍵化組分在丙酮做反應試劑的條件下經光化學反應即帕特諾比希反應(反應)獲得光化學產物，該類產物經HPLC?MS驗證為[2+2]環加成產物；上述雙鍵化組分被命名為7'?烯基多黏菌素E1和6'?烯基多黏菌素E2。多黏菌素E雙鍵化組分可能具有不同于常見多黏菌素E組分的抗菌活性或毒性，有潛在的應用價值，并且該類化合物的結構確證也為嚴格控制多黏菌素E的質量提供了研究基礎。

技術領域

本發明屬于藥物化學和藥物分析化學領域，尤其涉及一種多黏菌素E (PolymyxinE，PME)組分及其光化學產物和液相色譜-質譜分析方法。

背景技術

多黏菌素E(PME)由多黏類芽孢桿菌發酵產生的多組分脂肽類混合物，臨床上主要應用硫酸PME(或稱之為黏菌素，Colistin)或多黏菌素E甲磺酸鈉作為“最后一道防線”來治療多重耐藥革蘭陰性菌感染。由于單獨使用PME時需提高劑量，但腎毒性隨之增加，因而采用聯合用藥或霧化吸入成為一種減小毒性、提高治療效果的趨勢，另外，開發低毒、高效的PME單一組分也成為近年來的研究熱點(J Med Chem，2018，61(5)：1845-1857)。

PME主要組分(E1、E2、E3、E1-I和E1-7'MOA)的結構通式及信息如下：

PME主要組分由N-端脂肪酰基鏈(Fatty acyl，FA)、線性三肽及環狀七肽構成，1、3、4、8及9位均為L-α,γ-二氨基丁酸(Dab)，2及10位為L-蘇氨酸 (Thr)，6位為D-亮氨酸(Leu)，7位為L-Leu或異亮氨酸(Ile)。不同組分的脂肪鏈取代基或氨基酸的不同造成結構之間存在差異，對多黏菌素組分的分析方法主要有液相色譜(《歐洲藥典》9.0版)、液質聯用(J Chromato A，2002， 976(2)：65–78)及毛細管電泳方法(Electrophoresis,2000,21(18):3199-3204)。由于PME是含有多種組分的混合物，對其組分分析及結構鑒定具有一定的難度。雖然目前已有二十余種PME組分被發現，但由于不同的發酵菌或發酵條件而產生出其他不同組分，該類組分有著不同的抗菌活性及毒性。目前仍存在未被發現的PME組分。

發明內容

為了克服現有技術存在的問題，本發明公開了一類新的多黏菌素E雙鍵化組分，具體為多黏菌素E雙鍵化組分7'-烯基多黏菌素E1和6'-烯基多黏菌素E2的結構，并首次經HPLC-MS分析方法結合二級質譜確證，并經光化學反應即帕特諾-比希反應(反應)獲得光化學產物，該類產物經HPLC-MS驗證為[2+2]環加成產物，其為首次得到的雙鍵化組分的[2+2]環加成產物，也通過 HPLC-MS確認了該類光化學產物的結構。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一個方面是提供一種多黏菌素E組分，其包括多黏菌素E雙鍵化組分。

進一步地，所述多黏菌素E雙鍵化組分包括多黏菌素E1雙鍵化組分和多黏菌素E2雙鍵化組分。

進一步地，所述多黏菌素E1雙鍵化組分為4'-烯基多黏菌素E1、5'-烯基多黏菌素E1、6'-烯基多黏菌素E1或7'-烯基多黏菌素E1；所述多黏菌素E2雙鍵化組分為4'-烯基多黏菌素E2、5'-烯基多黏菌素E2或6'-烯基多黏菌素E2。

進一步地，所述雙鍵位于N-脂肪酰基鏈末端，所述多黏菌素E1雙鍵化組分為7'-烯基多黏菌素E1，所述多黏菌素E2雙鍵化組分為6'-烯基多黏菌素E2；

其中，所述7'-烯基多黏菌素E1的結構式如下：