[發明專利]長裂苦苣菜生物堿三級分離物及其分離方法和應用有效
| 申請號： | 201910727780.2 | 申請日： | 2019-08-07 |
| 公開（公告）號： | CN110563774B | 公開（公告）日： | 2020-11-06 |
| 發明（設計）人： | 李秀梅;楊培龍;潘方方;石冬冬;聞治國;滿晨 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院飼料研究所 |
| 主分類號： | C07G5/00 | 分類號： | C07G5/00;B01D11/02;A61K36/28;A61P39/06;A23K10/30;A23L33/105 |
| 代理公司： | 北京法信智言知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11737 | 代理人： | 劉靜榮 |
| 地址： | 100081 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 苦苣 生物堿 三級 分離 及其 方法 應用 | ||
1.長裂苦苣菜生物堿三級分離物，其特征在于，所述三級分離物由包括以下步驟的方法制備得到：
(1)制備長裂苦苣菜提取物，所述長裂苦苣菜提取物由包括以下步驟的方法制備得到：
以75％乙醇為溶劑，將長裂苦苣菜制成液料比為30mL/g的提取溶液，調節提取溶液的pH為5，進行超聲提取，超聲提取后，靜置，取上清液，旋轉蒸發后冷卻干燥即得，其中，超聲提取的功率為700W，溫度為55℃，超聲時間為30min；
(2)將步驟(1)得到的長裂苦苣菜提取物配制成100mg/mL的供試液，采用制備色譜法進行分離，色譜條件如下：
采用C18硅膠柱，以0.1％甲酸水溶液為流動相A，以甲醇為流動相B，流速10mL/min，柱溫27-33℃，波長為255-265nm，梯度洗脫程序為：
在0-5min的時間范圍內，流動相A的體積由95％變為60％，流動相B的體積由5％變為40％；
在5-15min的時間范圍內，流動相A的體積由60％變為30％，流動相B的體積由40％變為70％；
在15-30min的時間范圍內，流動相A的體積由30％變為20％，流動相B的體積由70％變為80％；
在30-35min的時間范圍內，流動相A的體積保持為20％，流動相B的體積保持為80％；
收集峰高范圍在420-2000mAU的餾分，得到初級分離物；
(3)將步驟(2)得到的初級分離物濃縮、干燥后，配制成10mg/mL的供試液并采用制備色譜法分離，色譜條件如下：
采用C18硅膠柱，以0.1％甲酸水溶液為流動相A，以甲醇為流動相B，流速10mL/min，柱溫27-33℃，波長為255-265nm，梯度洗脫程序為：
在0-5min的時間范圍內，流動相A的體積由95％變為60％，流動相B的體積由5％變為40％；
在5-15min的時間范圍內，流動相A的體積由60％變為30％，流動相B的體積由40％變為70％；
在15-30min的時間范圍內，流動相A的體積由30％變為20％，流動相B的體積由70％變為80％；
在30-35min的時間范圍內，流動相A的體積保持為20％，流動相B的體積保持為80％；
收集峰高范圍在0.2-1.8AU的餾分，得到次級分離物；
(4)采用分析色譜法分離步驟(3)得到的次級分離物，色譜條件如下：
采用C18硅膠柱，以0.1％甲酸水溶液為流動相A，以甲醇為流動相B，流速1mL/min，柱溫30℃，波長為260nm，梯度洗脫程序為：
在0-8min的時間范圍內，流動相A的體積由95％變為75％，流動相B的體積由5％變為25％；
在8-10min的時間范圍內，流動相A的體積由75％變為65％，流動相B的體積由25％變為35％；
在10-20min的時間范圍內，流動相A的體積由65％變為40％，流動相B的體積由35％變為60％；
在20-24min的時間范圍內，流動相A的體積由40％變為20％，流動相B的體積有60％變為80％；
在24-27min的時間范圍內，流動相A的體積保持為20％，流動相B的體積保持為80％，收集16-18min的餾分，得到三級分離物。
2.根據權利要求1所述的長裂苦苣菜生物堿三級分離物，其特征在于，步驟(2)中，柱溫為30℃，波長為260nm。
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