[發明專利]雞新型環狀病毒與雞傳染性貧血病毒鑒別診斷試劑盒

有效

• 申請號: 201910726472.8
• 申請日: 2019-08-07
• 公開（公告）號: CN110628943B
• 公開（公告）日: 2022-09-30
• 發明（設計）人: 于可響;宋敏訓;李玉峰;袁小遠;路曉;胡峰;郭效珍;馬秀麗;黃兵
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院家禽研究所
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京國坤專利代理事務所(普通合伙) 11491
• 代理人: 趙紅霞

本發明公開了一種用于鑒別雞新型環狀病毒與雞傳染性貧血病毒的特異性引物，包括用于檢測雞新型環狀病毒的檢測引物GyV3?1/GyV3?2，和用于檢測雞傳染性貧血病毒的檢測引物CIAV?5/CIAV?6；其核苷酸序列如SEQ ID NO.1?4所示。一種雞新型環狀病毒與雞傳染性貧血病毒鑒別診斷試劑盒，包括上述用特異性引物，以及陽性質粒。一種鑒別雞新型環狀病毒與雞傳染性貧血病毒的方法：提取待測樣品的基因組DNA，利用特異性引物進行擴增，對擴增產物進行電泳并觀察有無擴增條帶，從而作出判斷。本發明對兩種病毒DNA的最低檢出量均低于100拷貝，且對其他常見雞源病毒均檢不出，具有敏感性高、特異性好等優點。

技術領域

本發明涉及一種雞新型環狀病毒與雞傳染性貧血病毒鑒別診斷試劑盒及其應用，屬于生物檢測技術領域。

背景技術

雞傳染性腺胃炎(Transmissible viral proventriculitis，TVP)是由病原引起的、導致腺胃病變的一種傳染病，以糞便過料、生長不良、極度消瘦為主要臨床癥狀，以腺胃腫大如球、腺胃壁增厚、腺胃黏膜出血或潰瘍為主要剖檢病變。該病是我國肉雞生產中常見疾病，嚴重影響肉雞的生產性能，每年都給我國的養雞業造成了極大的經濟損失。

雞新型環狀病毒(Gyrovirus 3,GyV3)是近幾年新發現的能引起雞腺胃炎的病原；雞傳染性貧血病毒(Chicken Infectious Anemia Virus,CIAV)除了能引起雞再生障礙性貧血外，也是雞腺胃炎的病原之一。這兩種病毒在基因結構上十分相似，均是單鏈環狀DNA病毒，也是目前已知僅有的兩種能引起雞發病的圓環病毒，而且它們都是雞傳染性腺胃炎的致病病原，因此生產中迫切需要一種快速鑒別這兩種病原的方法，以提高疾病治療的針對性。

發明內容

針對上述現有技術，本發明提供了一種雞新型環狀病毒與雞傳染性貧血病毒鑒別診斷試劑盒,以快速鑒別這兩種能引起雞腺胃炎的病原。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種用于鑒別雞新型環狀病毒與雞傳染性貧血病毒的特異性引物，包括用于檢測雞新型環狀病毒的檢測引物GyV3-1/GyV3-2，和用于檢測雞傳染性貧血病毒的檢測引物CIAV-5/CIAV-6；所述檢測引物GyV3-1/GyV3-2的核苷酸序列如下所示，如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，其擴增片段大小為337bp；

GyV3-1：5'-CTGGTCGTGCGTGGAAA-3'(SEQ ID NO.1)；

GyV3-2：5'-GGTATGAATACGAGCCCTTG-3'(SEQ ID NO.2)。

所述檢測引物CIAV-5/CIAV-6的核苷酸序列如下所示，如SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4所示，其擴增片段大小為665bp；

CIAV-5：5'-CGCTGGAATTACAATCACTC-3'(SEQ ID NO.3)；

CIAV-6：5'-GTCCGCAATCAACTCACC-3'(SEQ ID NO.4)。

上述引物在制備雞新型環狀病毒與雞傳染性貧血病毒鑒別診斷試劑盒中的應用。

一種雞新型環狀病毒與雞傳染性貧血病毒鑒別診斷試劑盒，包括上述用于鑒別雞新型環狀病毒與雞傳染性貧血病毒的特異性引物，以及陽性質粒，還包括PCR反應所必需的試劑；所述陽性質粒為重組質粒T-GyV3和T-CIAV。

進一步地，所述試劑盒以100次用量計，包括如下組分：PCR反應液4800μL，陽性質粒200μL；所述PCR反應液中含有上述用于鑒別雞新型環狀病毒與雞傳染性貧血病毒的特異性引物；所述陽性質粒為終濃度均為0.1ng/μL的重組質粒T-GyV3和T-CIAV的混合物。

進一步地，所述PCR反應液體系由如下組分組成：