[發明專利]一種提取分離紫草根有效成分的方法及其提取物在制備抑制結腸癌細胞生長藥物中的應用

在審

• 申請號: 201910725295.1
• 申請日: 2019-08-07
• 公開（公告）號: CN110302232A
• 公開（公告）日: 2019-10-08
• 發明（設計）人: 董子鋼;李美賢;趙冉;曼加拉多斯.弗雷迪莫西斯;劉康棟
• 申請（專利權）人: 中美（河南）荷美爾腫瘤研究院
• 主分類號: A61K36/30
• 分類號: A61K36/30;A61P35/00;C07C46/10;C07C50/32;A61K125/00
• 代理公司: 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104
• 代理人: 張麗

本發明公開了一種提取分離紫草根有效成分的方法及其提取物在制備抑制結腸癌細胞生長藥物中的應用，利用高純度的乙醇對紫草根進行提取獲得粗提取物；將粗提取物稀釋后通過石油醚，乙酯和正丁醇萃取獲得濃縮產物；該濃縮產物經正己醇?氯仿?甲醇洗脫經大孔吸附樹脂進行分離，獲得5種有效提取成分；5種有效成分中含有脫氧紫草素，β,β?二甲基丙烯酰阿卡寧，乙酰紫草素，β?乙酰氧基異戊酰阿卡寧和紫草醌等成分。本發明通過細胞增殖實驗，驗證了脫氧紫草素，β,β?二甲基丙烯酰阿卡寧，乙酰紫草素，β?乙酰氧基異戊酰阿卡寧和紫草醌在人源結直腸癌細胞系中的抑制效果，本發明提供的提取方法操作簡單，條件溫和，成本較低，且提取效率高。

技術領域

本發明屬于天然藥物化學領域，具體涉及一種通過兩步層析法提取分離紫草根中有效成分的方法及其提取物制備抑制結腸癌細胞生長藥物中的應用。

背景技術

紫草屬于紫草科多年生草本植物，此草花紫根紫，可以染紫，又名山紫草、紫芙、藐、地血、鴉銜草、紫草根，主要分布于美國、東南部沿海地區、中美、歐洲及溫帶地區、太平洋及印度洋島嶼。中國地區也有紫草產地分布于遼寧、山西、湖南、甘肅、山東、湖北、廣西、四川、陜西、貴州、江西、河北、河南等地以及日本、朝鮮，生長于海拔50米至2,500米的地區，多生長在山坡草地，目前已經開始人工引種栽培，是中草藥的一種，春秋挖根，除去殘莖及泥土(勿用水洗，以防退色)，曬干或微火烘干，生用，具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗腫瘤等作用。

紫草的根和花均含色素，乙酰紫草醌、紫草烷、異丁酰紫草醌等。紫草根為清熱涼血類中藥，性寒，味甘，咸，能清熱涼血，化斑解毒，活血透疹，常用于血熱毒盛，發斑發疹等?，F代醫學認為紫草根由解熱，抗病毒，抗過敏和抗癌等作用。

據報道紫草根對絨毛膜上皮癌及惡性葡萄胎有一定的療效，此外紫草根對急性淋巴細胞性白血病有輕度的抑制作用。乙酰紫草素作為紫草的主要成分，是由新疆紫草細胞大規模培養技術生產的萘醌類色素化合物，具有抗癌活性。有研究表明乙酰紫草素可通過誘導細胞的JNK以及p38的磷酸化誘導細胞凋亡，進而抑制口腔細胞鱗狀癌的發生發展。

癌癥已成為中國首位死亡原因，是嚴重的公共衛生問題。據統計結果顯示，中國結腸癌是最常見的癌癥類型，也是最多見的癌癥死亡原因。癌癥是由環境、飲食以及生活方式與遺傳因素協同作用的結果，由致癌物作用結合細胞遺傳因素導致細胞遺傳基因突變而逐漸發展為癌。癌癥早期的臨床癥狀不明顯，當臨床癥狀較為突出時，患者的病情已經處于中期或者晚期，所以選擇安全有效的預防和治療癌癥的方法對于改善患者的預后及生活質量都具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于提供一種提取分離紫草根有效成分的方法及其提取物在制備抑制結腸癌細胞生長藥物中的應用。

基于上述目的，本發明采取如下技術方案：

一種提取分離紫草根有效成分的方法，包括如下步驟：

(1)使用乙醇對紫草根原料回流提取獲得紫草根的提取液，將所得提取液進行濃縮獲得粗提取物；

(2)將步驟(1)所得粗提取物用水稀釋，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，獲得有效成分；

(3)將步驟(2)所得的有效成分通過孔徑為200-300nm大孔吸附樹脂柱進行分離，洗脫液為正己烷-氯仿-甲醇三者混合溶液，正己烷、氯仿和甲醇體積比例為25:6:1，利用薄層色譜進行鑒定，合并收集同一種成分的洗脫液并進行濃縮，獲得7種提取成分，成分1，2，3，4和5為有效成分的粗品，成分6和7中是紫草根中的植物殘渣，優選地，大孔吸附樹脂柱直徑為5cm，高度為20cm，正己烷-氯仿-甲醇三者混合液用量為4L，提取物1，2，3，4和5的質量分別為2.856g，12.56g，42.34g，18.37g，19.25g和4.765g，成分6和7中主要是紫草根中的植物殘渣，化合物含量較低。