[發明專利]一種用于掃描電鏡觀察的幼嫩植物的快速制樣方法

在審

• 申請號: 201910725159.2
• 申請日: 2019-08-07
• 公開（公告）號: CN110487830A
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發明（設計）人: 周瓊;廖天藍;裴艷艷;任惠;辛佳佳;蒙思悅;伍玉玲;黃朝戟;李剛
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: G01N23/2202
• 分類號: G01N23/2202;G01N23/2251
• 代理公司: 45104 廣西南寧公平知識產權代理有限公司
• 代理人: 黃永校<國際申請>=<國際公布>=<進入

一種用于掃描電鏡觀察的幼嫩植物的快速制樣方法，包括如下步驟：取新鮮植物材料用FAA固定液浸泡固定24h以上，將已固定的材料用系列梯度酒精脫水，把經脫水后的材料逐步置于用無水乙醇和純TO透明劑配成不同比例配置的試劑中進行透明。脫水透明的每個步驟操作均采用真空抽氣機抽氣20分鐘,室內自然條件靜置30分鐘。最后一次抽氣完成后，將材料從純TO透明劑中取出放入培養皿中靜置至材料中TO透明劑揮發完，即可置于掃描電鏡下觀察。該方法能較好的保持不同植物包括成熟的及幼嫩組織中細胞的形態。

技術領域

本發明屬于電鏡樣品制備方法的技術領域，涉及一種用于掃描電鏡觀察的幼嫩植物的快速制樣方法。

背景技術

應用掃描電鏡觀察生物樣品表面的微小形態特征，以獲得比光學顯微鏡觀察結果更為詳盡、細微的結構特征，是生物學研究的重要手段之一。而能否獲得真實、清晰、理想的掃描電鏡觀察結果，樣品的制備過程是關鍵。用于常規的掃描電鐿觀察的樣品必須是經過徹底干燥處理的。含水高的樣品在掃描電鏡真空的鏡筒中會造成不良的后果，如圖像模糊，出現霧狀，或者根本不能成像；或者在真空中容易發生形態損傷，使研究特征皺縮、變形；造成物鏡、鏡頭、光闌等的污染；燈絲碰到水蒸氣而氧化變質甚至熔斷等等。

生物樣品不同于礦物和金屬，它具有柔軟多水的特點，因此，在高真空的掃描電鏡中進行觀察時，必須對樣品進行一系列的干燥處理，常規的處理方法是：樣品采后立即置于鋨酸或戊二醛固定液中固定，然后再用丙酮或酒精逐級脫水，脫水后對樣品表面進行噴金或噴碳處理，以保證樣品具有良好的導電性。除了以上方法還有自然干燥法、烘干干燥法、臨界點干燥法、真空干燥法等干燥方法，這些干燥方法各有優缺點，且適合不同的生物樣品種類，通過這樣處理以后可以得到生物樣品表面形貌的清晰圖象，但同時也存在許多的缺陷，主要表現為制樣過程復雜繁瑣冗長，另一方面，樣品經過一系列的處理后，樣品本身會發生不同程度的收縮變形，特別是幼嫩的及水生植物。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于掃描電鏡觀察的幼嫩植物的快速制樣方法。該方法主要采用從低濃度乙醇逐級脫水并采用TO透明劑最后替換乙醇，用TO透明劑可以防止制片材料收縮變形、變硬變脆的特點，且與水不相溶，具有揮發性，還具有透明的特點，同時從固定到脫水整個過程所用藥品均無毒，整個操作簡單易行，處理后的幼嫩生物樣品表面形貌沒有發生體積變化、結構皺縮或干裂等變形的現象，圖像清晰，且干燥徹底。

本發明的技術方案是：一種用于掃描電鏡觀察的幼嫩植物的快速制樣方法，包括如下步驟：

(1)、將新鮮植物材料放入試管中，加入FAA固定液中固定24h以上，若植物組織過于幼嫩，可用50％乙醇配置固定液用于固定；

(2)、將已固定的材料用系列梯度乙醇進行脫水處理；

(3)、把經脫水后的材料逐步置于用無水乙醇和純TO透明劑配成不同比例的試劑中進行透明處理；

脫水、透明的每個步驟操作均采用真空抽氣機抽氣20分鐘,室內自然條件靜置30分鐘；

(4)、最后一次抽氣完成后，將材料從純TO透明劑中取出放入培養皿中靜置至材料中TO透明劑揮發完，即可置于掃描電鏡下進行電鏡觀察。

所述FAA固定液是指按l50％乙醇90m+福爾馬林5ml+冰乙酸5ml比例配置成的固定液。

所述TO透明劑是指TO型生物制片透明劑。

所述用系列梯度乙醇進行脫水處理是指用30％、40％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％系列梯度乙醇進行脫水處理。

所述無水乙醇和純TO透明劑配成不同比例的試劑為：2/3無水乙醇+1/3純To透明劑→1/2無水乙醇+1/2純To透明劑→1/3無水醇+2/3純To透明劑→純ToⅠ透明劑→純ToⅡ透明劑。