[發明專利]脂阿拉伯甘露聚糖檢測增敏劑及其組合物和試劑盒

有效

• 申請號: 201910720315.6
• 申請日: 2019-08-06
• 公開（公告）號: CN110501492B
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 盛盼龍;朱紹榮
• 申請（專利權）人: 上海榮盛生物藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/545;G01N33/569
• 代理公司: 北京萬景律師事務所 11993
• 代理人: 魏渲輝

一種結核分枝桿菌脂阿拉伯甘露聚糖抗體檢測增敏劑，其為SEQ ID No 1所示的多肽，或SEQ ID No 2所示的多肽和SEQ ID No 3所示的多肽分別與SEQ ID No 1所示的多肽形成組合物，再與結核分枝桿菌脂阿拉伯甘露聚糖抗原共包被，實現結核分枝桿菌的檢測。本發明采用脂阿拉伯甘露聚糖抗原和多肽(或組合物)共包被的方式，實現了對結核桿菌抗體的特異性檢測，并具有較高的靈敏度，適合于體外檢測。

技術領域

本發明涉及一種多肽助劑，尤其涉及一種提高檢測靈敏度和特異性的增敏劑，用于脂阿拉伯甘露聚糖的檢測，以及檢測組合物和檢測試劑盒。

背景技術

結核病是一種數千年來一直困擾人類的傳染病，并且估計十九世紀歐洲1/4的成年人口死于結核病。由于二十世紀生活標準的改善以及抗生素的發現，到二十世紀五十年代，工業化國家已經幾乎根除了結核病。然而，作為復發的傳染病，結核病仍然是猖獗的。在當下，估計在世界人口中三個人中有一個感染結核桿菌(tubercle bacillus)(潛伏的結核病)。據說世界上新發作的結核病患者的總數有九百四十萬，并且估計其中有兩百萬名患者死于該病。目前，大約95％的活動性結核病(active tuberculosis)患者生活在發展中國家，99％的死于結核病的人集中在發展中國家。

LAM抗原結核桿菌通過獨特的細胞壁結構在屬主體內生存、繁殖。其結核桿菌細胞壁含有多種成分，如：孔蛋白(Porin)，多糖，脂類(Lipids)，霉菌酸(mycolic acid),磷脂酰肌醇甘露糖苷(phosphatidylinositol mannosides，PIM)，脂甘露聚糖(lipomannans，LM)，脂阿拉伯甘露聚糖(lipoarabinomannan，LAM)。其中，LAM是分枝桿菌細胞壁的主要成分，達15毫克/g細菌總重量。LAM廣泛影響受感染的宿主的免疫系統。據報道，從結核分枝桿菌和麻風桿菌分離出的LAM能引起T細胞增殖抑制，干擾與干擾素介導的巨噬細胞激活，清除有毒的游離氧自由基，抑制蛋白激酶活性及基因編碼介素(IL)-2和IL-5和粒細胞合成/巨噬細胞集落刺激人類T細胞因子，誘導巨噬細胞即刻早期基因表達，促進單核細胞腫瘤壞死因子的生成增強及補體活化。研究結果表明，作為屬特異性抗原LAM，具有較強的免疫原性和免疫調節功能，參與了結核桿菌感染的許多過程，有助于及時檢測結核病發病(肺結核)以及其他分枝桿菌感染。

酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA)是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體(聚苯乙烯微量反應板)表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除，通過酶聯免疫檢測儀對其吸光度進行檢測，該方法既可以定性，也可以定量測定各種病原體的抗原、抗體，該技術在醫學檢驗、科研、環境監測和食品安全等有著廣泛的應用。

該類試劑常常以完整的試劑盒的方式提供，并且配套專門的酶聯免疫檢測儀，根據檢測的吸光度值對結果進行判斷，試劑中的所用的酶一般為辣根過氧化酶(HorseradishPeroxidase，HRP)，該酶比活性高，穩定，分子量小，純酶容易制備，所以最常用。HRP可用作過氧化物酶的底物，通過H₂O₂和魯米諾系統，在HRP(辣根過氧化物酶)的作用下，發出熒光來。因此在臨床診斷上應用最廣泛。

該類試劑盒的性能指標通常包括：分析靈敏度、臨床靈敏度、特異性、精密性、準確度、線性范圍和穩定性等。只有同時滿足上述指標的綜合要求，才能通過注冊上市申請，取得上市銷售許可證。

酶聯免疫試劑盒通常包含以下部件：酶聯免疫發光板、包被抗原(抗體)、酶標抗體和發光底物。其制備過程包括以下流程：將包被抗原(抗體)包被到酶聯免疫檢測板上；所用發光酶標記到抗體上。