[發(fā)明專利]間充質(zhì)干細胞制劑及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請日: 2019-08-02
• 公開（公告）號: CN110339212A
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高迎鳳
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西佰傲干細胞再生醫(yī)學(xué)有限公司
• 主分類號: A61K35/28
• 分類號: A61K35/28;A61K47/36;A61K9/10;A61P19/02;A61P29/00;A61K35/16
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1.間充質(zhì)干細胞制劑，其特征在于，包含以下組分：間充質(zhì)干細胞、血漿和分散介質(zhì)；所述間充質(zhì)干細胞為經(jīng)過炎性細胞因子處理的間充質(zhì)干細胞，所述血漿為富含血小板的血漿。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細胞制劑，其特征在于，所述炎性細胞因子處理所述間充質(zhì)干細胞的過程為：取傳代至P4代的間充質(zhì)干細胞，接種于含有10% FBS和炎性細胞因子的α-MEM培養(yǎng)液中，于37℃，濃度為5%的CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h，即獲得經(jīng)過炎性細胞因子處理的間充質(zhì)干細胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的間充質(zhì)干細胞制劑，其特征在于，所述炎性細胞因子選自TNF-α，所述TNF-α在培養(yǎng)液中的終濃度為20 ng/ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細胞制劑，其特征在于，所述間充質(zhì)干細胞選自骨髓間充質(zhì)干細胞、脂肪間充質(zhì)干細胞、滑膜間充質(zhì)干細胞、臍帶間充質(zhì)干細胞中的一種或多種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細胞制劑，其特征在于，所述間充質(zhì)干細胞制劑中間充質(zhì)干細胞的濃度為10⁶～10⁸/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細胞制劑，其特征在于，所述富含血小板的血漿中血小板濃度為2～3×10⁶個/ul。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細胞制劑，其特征在于，所述富含血小板的血漿與分散介質(zhì)的體積比為1:1～2:1。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細胞制劑，其特征在于，所述分散介質(zhì)選自復(fù)方電解質(zhì)溶液或生理鹽水。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的間充質(zhì)干細胞制劑,，其特征在于，所述分散介質(zhì)中添加有5%的低分子肝素。

10.間充質(zhì)干細胞制劑的制備方法，其特征在于，包含以下步驟：

（1）間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)：分離間充質(zhì)干細胞后，接種于含有10% FBS的α-MEM培養(yǎng)基中，于37℃，濃度為5%的CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞融合度為80%-85%時，用0.20%胰酶消化傳代；

（2）使用炎性細胞因子誘導(dǎo)間充質(zhì)干細胞：取傳代至P4代的上述間充質(zhì)干細胞，接種于含有10% FBS和炎性細胞因子的α-MEM培養(yǎng)液中，于37℃，濃度為5%的CO₂培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h；

（3）富含血小板的血漿的制備：取加入抗凝劑的靜脈血，采用兩步離心法濃縮血小板，獲取血小板濃度為 2-3×10⁶ 個/ul的血漿；

（4）間充質(zhì)干細胞制劑的制備：將TNF-α刺激后的間充質(zhì)干細胞消化清洗后，計數(shù)待用，將富含血小板血漿與分散介質(zhì)以1:1～2:1的體積比混合，懸浮待用細胞，使間充質(zhì)干細胞的細胞濃度為10⁶～10⁸/ml。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的制備方法，其特征在于，所述炎性細胞因子選自TNF-α，所述TNF-α在培養(yǎng)液中的終濃度為20 ng/ml。

12.權(quán)利要求1-9任一項所述的間充質(zhì)干細胞制劑在制備治療骨關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。