[發(fā)明專利]一種毛冬青愈傷組織的誘導(dǎo)方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910709075.X
• 申請(qǐng)日: 2019-08-01
• 公開（公告）號(hào): CN110495392A
• 公開（公告）日: 2019-11-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何瑞;楊曜榕;張奔騰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣州中醫(yī)藥大學(xué)(廣州中醫(yī)藥研究院)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 44102 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 任重<國際申請(qǐng)>=<國際公布>=<進(jìn)入國

本發(fā)明公開了一種毛冬青愈傷組織的誘導(dǎo)方法。所述誘導(dǎo)方法包括以下步驟：S1.材料的預(yù)處理：將毛冬青葉片洗凈后先用75％乙醇溶液消毒20～40s，再用含有吐溫?80的0.1％升汞消毒2～10min，將消毒后的毛冬青葉片切割成適宜的大小；S2.愈傷組織的誘導(dǎo)：將葉片作為外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，消毒3～8min，然后置于22～26℃、光照條件下培養(yǎng)至長出愈傷組織。本發(fā)明以毛冬青葉片作為外植體，研究了適合葉片愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，能誘導(dǎo)出毛冬青愈傷組織。本發(fā)明方法操作簡便，通過該方法可成功誘導(dǎo)毛冬青愈傷組織，為獲得其次生代謝產(chǎn)物提供方法基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體地，涉及一種毛冬青愈傷組織的誘導(dǎo)方法。

背景技術(shù)

毛冬青(Ilex pubescens)是冬青科冬青屬植物。分布于中國安徽、浙江、江西、福建、臺(tái)灣、廣東、海南、香港、廣西和貴州。毛冬青為中國南方常用中藥，主治清熱解毒、活血通絡(luò)。毛冬青的根是我國重要的冬青屬植物藥材，有抗凝降壓、保護(hù)腦組織、抗炎免疫等作用，在臨床可治療冠心病，脈管炎，慢性腎炎，缺血性腦中風(fēng)，急性上呼吸道感染等，具有重要的藥用經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

近年來隨著毛冬青制劑需求量的增長，原料藥材市場(chǎng)缺口較大。毛冬青藥材主要來源于野生資源，其種子萌發(fā)率低，扦插繁殖生根較困難。目前有關(guān)毛冬青的組織培養(yǎng)研究多集中在扦插繁殖、誘導(dǎo)生根繁殖等方面，暫未見研究誘導(dǎo)愈傷組織相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種毛冬青愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，采用該誘導(dǎo)培養(yǎng)基進(jìn)行葉片愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，葉片愈傷組織的誘導(dǎo)率相對(duì)較高。

本發(fā)明的另一目的在于提供一種毛冬青愈傷組織的誘導(dǎo)方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明是通過以下方案予以實(shí)現(xiàn)的：

本發(fā)明通過探索消毒方法以及培養(yǎng)基配方對(duì)誘導(dǎo)毛冬青愈傷組織的影響，單因素實(shí)驗(yàn)選取最佳培養(yǎng)方案。結(jié)果表明，使用75％乙醇與0.1％升汞(添加適量的吐溫-80)配合消毒，培養(yǎng)基添加新型組培抗污染劑PTC³。使用幼嫩葉片為外植體，最佳條件為：當(dāng)毛冬青的苗齡>10年時(shí)，用含有吐溫-80的0.1％升汞消毒8min，接種培養(yǎng)基MS+3％蔗糖+0.9％瓊脂+0.50mg/L 2,4-D+1.5mg/L 6-BA；當(dāng)毛冬青的苗齡為1～5年時(shí)，用含有吐溫-80的0.1％升汞消毒4min，接種培養(yǎng)基1/2MS+2％蔗糖+0.7％瓊脂+0.75mg/L 2,4-D+2.0mg/L 6-BA；當(dāng)毛冬青的苗齡<1年時(shí)，用含有吐溫-80的0.1％升汞消毒3min，接種培養(yǎng)基MS+3％蔗糖+0.9％瓊脂+0.50mg/L 2,4-D+1.5mg/L 6-BA。最終成功建立了毛冬青愈傷組織的誘導(dǎo)方法。

因此，本發(fā)明請(qǐng)求保護(hù)一種毛冬青愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)基，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是含有0.5～1.0mg/L 2,4-D、1.0～2.0mg/L 6-BA、2.0～3.0％(w/v)蔗糖和0.5～1.0％(w/v)瓊脂的MS培養(yǎng)基或1/2MS培養(yǎng)基，pH 6.0。

優(yōu)選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是含有0.5mg/L 2,4-D、1.5mg/L 6-BA、3.0％(w/v)蔗糖和0.9％(w/v)瓊脂的MS培養(yǎng)基，pH 6.0。

優(yōu)選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基是含有0.75mg/L 2,4-D、2.0mg/L 6-BA、2.0％(w/v)蔗糖和0.7％(w/v)瓊脂的1/2MS培養(yǎng)基，pH 6.0。

更優(yōu)選地，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基中還含有1.5mL/L PTC³。

本發(fā)明還請(qǐng)求保護(hù)一種毛冬青愈傷組織的誘導(dǎo)方法，包括以下步驟：

S1.材料的預(yù)處理：將毛冬青葉片洗凈后先用75％乙醇溶液消毒20～40s，再用含有吐溫-80的0.1％升汞消毒2～10min，將消毒后的毛冬青葉片切割成適宜的大小；