[發(fā)明專利]一種穩(wěn)定快速生產(chǎn)ε-聚賴氨酸的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910707758.1
• 申請日: 2019-08-01
• 公開（公告）號: CN110373439B
• 公開（公告）日: 2021-04-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭鳳柱;周斌;朱勇剛;梅吉雷;湯強;張秋生;張利鋼;孟根水;賈士儒
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江新銀象生物工程有限公司
• 主分類號: C12P13/02
• 分類號: C12P13/02;C12N1/20;C12R1/465
• 代理公司: 北京瑞盛銘杰知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11617
• 代理人: 李績

1.一種穩(wěn)定、快速生產(chǎn)ε-聚賴氨酸的方法，其特征在于：步驟如下：將鏈霉菌孢子懸液接種于種子培養(yǎng)基中，進行種子培養(yǎng)，待pH降至4.0-6.0，得到種子液，將所述種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，在溫度28-32℃，溶氧20-50％下發(fā)酵培養(yǎng)，當(dāng)發(fā)酵液中葡萄糖濃度降至8-10g/L時，流加補料培養(yǎng)基，恒定發(fā)酵液中葡萄糖濃度在10-12g/L；待發(fā)酵液pH降至3.0-4.5，維持恒定pH 3.0-4.5；待ε-聚賴氨酸不再增加，結(jié)束發(fā)酵；所述鏈霉菌保藏號為：CGMCCNo.3145。

2.如權(quán)利要求1所述一種穩(wěn)定、快速生產(chǎn)ε-聚賴氨酸的方法，其特征在于：所述種子培養(yǎng)中，待所述pH降至4.5-5.5，得到種子液。

3.如權(quán)利要求1所述一種穩(wěn)定、快速生產(chǎn)ε-聚賴氨酸的方法，其特征在于：所述發(fā)酵培養(yǎng)中，待所述發(fā)酵液pH降至3.5-4.5，維持恒定pH 3.5-4.5。

4.如權(quán)利要求1所述一種穩(wěn)定、快速生產(chǎn)ε-聚賴氨酸的方法，其特征在于：所述鏈霉菌孢子懸液的制備步驟為：取生長成熟的鏈霉菌孢子加入生理鹽水中，經(jīng)搖勻，棉紗過濾，再加生理鹽水將鏈霉菌孢子重懸浮，按照上述方法繼續(xù)過濾1-3次，得到孢子懸液，所述孢子懸液所含孢子量為10⁷-10⁸個/ml。

5.如權(quán)利要求1所述一種穩(wěn)定、快速生產(chǎn)ε-聚賴氨酸的方法，其特征在于：所述孢子懸液接種至種子培養(yǎng)基的接種量為0.2％-2％；所述種子液的培養(yǎng)溫度為：28-32℃。

6.如權(quán)利要求1所述一種穩(wěn)定、快速生產(chǎn)ε-聚賴氨酸的方法，其特征在于：所述種子液接入發(fā)酵培養(yǎng)基的接種量為5％-20％；所述發(fā)酵的溶氧為20-35％。

7.如權(quán)利要求1所述一種穩(wěn)定、快速生產(chǎn)ε-聚賴氨酸的方法，其特征在于：所述補料培養(yǎng)基組成為(g/L)：葡萄糖600-1000，硫酸銨30-50，pH自然，余量為水。

8.如權(quán)利要求1所述一種穩(wěn)定、快速生產(chǎn)ε-聚賴氨酸的方法，其特征在于：具體步驟如下：

(1)取生長成熟的鏈霉菌孢子加入生理鹽水中，經(jīng)搖勻，棉紗過濾以濾掉菌絲，再加生理鹽水將鏈霉菌孢子重懸浮，按照上述方法繼續(xù)過濾1-3次，得到孢子懸液，所述孢子懸液所含孢子量為10⁷-10⁸個/ml；

(2)將所述孢子懸液按照接種量0.2％-2％接入種子培養(yǎng)基中，在溫度28-32℃下進行種子培養(yǎng)，待pH降至4.5-5.5時，得到種子液；

(3)將所述種子液按照接種量5％-20％，轉(zhuǎn)接至發(fā)酵培養(yǎng)基中進行發(fā)酵，在溫度28-32℃，溶氧20-35％下發(fā)酵培養(yǎng)；當(dāng)發(fā)酵液中殘余葡萄糖濃度降至8-10g/L時，流加補料培養(yǎng)基，使殘余葡萄糖濃度維持在10-12g/L；待發(fā)酵液pH降至3.5-4.5時，流加堿，維持恒定pH3.5-4.5；待ε-聚賴氨酸不再增加，結(jié)束發(fā)酵。

9.如權(quán)利要求8所述一種穩(wěn)定、快速生產(chǎn)ε-聚賴氨酸的方法，其特征在于：所述步驟(3)中，發(fā)酵培養(yǎng)方式為搖床振蕩培養(yǎng)、發(fā)酵罐攪拌培養(yǎng)或鼓泡培養(yǎng)中的一種，所述搖床振蕩培養(yǎng)的轉(zhuǎn)速為180-220r/min。

10.如權(quán)利要求8所述一種穩(wěn)定、快速生產(chǎn)ε-聚賴氨酸的方法，其特征在于：所述步驟(3)中，發(fā)酵培養(yǎng)基組成為(g/L)：碳源50-80、有機氮源5-10、無機氮源5-10，K₂HPO₄·3H₂O0.8，KH₂PO₄ 1.36，MgSO₄·7H₂O 0.5，ZnSO₄·7H₂O 0.04，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 0.04，pH 6.0-7.5，余量為水；所述碳源為葡萄糖、甘露糖、甘露醇、半乳糖、海藻糖、果糖或糖蜜中的一種或兩種以上的混合；所述有機氮源為酵母粉、酵母膏、玉米漿、蛋白胨或牛肉膏中的一種或兩種以上的混合，所述無機氮源硫酸銨、氯化銨、硝酸銨或尿素中的一種或兩種以上的混合。