[發(fā)明專利]一種甲胎蛋白快速檢測玻片的制備方法

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• 申請日: 2019-07-31
• 公開（公告）號: CN110411799A
• 公開（公告）日: 2019-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃承洪;蔣姝;馬財萬;方英;王康銳
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶科技學(xué)院
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 重慶市信立達專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50230
• 代理人: 陳炳萍

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種甲胎蛋白快速檢測玻片的制備方法，包括制作帶有氨基的硅片、氧化甲胎蛋白抗體和氧化甲胎蛋白抗體和硅片結(jié)合固定。本發(fā)明的制作方法簡單，制作成本低，方便檢測甲胎蛋白，檢測時間短，檢測靈敏度高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種甲胎蛋白快速檢測玻片的制備方法。

背景技術(shù)

甲胎蛋白(AFP)是一組不均質(zhì)蛋白質(zhì)組成的糖蛋白，人體甲胎蛋白來源于胎兒的糖蛋白，分子量約為70KDa，成人的甲胎蛋白可由惡性腫瘤產(chǎn)生，特別是肝癌和胚胎細胞腫瘤。70-95％的原發(fā)性肝癌患者血清中AFP含量有明顯升高，在肝炎和肝硬化的患者中甲胎蛋白也常有輕微的升高。因此，對AFP的臨床分子診斷顯得十分重要，尤其是靈敏度檢測對及早發(fā)現(xiàn)腫瘤并制定治療方案極為重要。

目前，傳統(tǒng)的檢測方法耗時長、成本高、操作繁瑣，因此，研發(fā)檢測速度快、方便檢測、檢測靈敏度高的甲胎蛋白檢測方法、檢測試劑和檢測裝置越來越受到業(yè)界的關(guān)注。

發(fā)明內(nèi)容

基于以上問題，本發(fā)明提供一種制作成本低、檢測速度快、靈敏度高的甲胎蛋白快速檢測玻片的制備方法。

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：

一種甲胎蛋白快速檢測玻片的制備方法，包括以下步驟：

S1：將硅片放置在H₂SO₄和H₂O₂的混合溶液中氧化30min，隨后用去離子水清洗三次，得到氧化硅片；

S2：將步驟S1中的氧化硅片放置在APTES和H₂SO₄的混合溶液中反應(yīng)2h，隨后依次用乙醇和PBS分別清洗三次；

S3：向PH為5.2的醋酸鈉-醋酸緩沖溶液中加入高碘酸鈉，直至高碘酸鈉的終濃度達到20mmol/L，隨后將甲胎蛋白抗體加入上述醋酸鈉-醋酸緩沖溶液中，直至甲胎蛋白的終濃度達到100ug/mL，隨后放置于暗室中攪拌氧化20min；

S4：步驟S3反應(yīng)完成后，向步驟S3的反應(yīng)溶液中加入乙二醇，直至乙二醇的終濃度達到3％，隨后依次用PH為5.2的醋酸鈉-醋酸緩沖溶液和PH為7.4的PBS溶液分別透析2小時和6小時，備用；

S5：將經(jīng)步驟S4處理之后的甲胎蛋白抗體的濃度調(diào)整至100ug/mL，隨后將上述甲胎蛋白抗體加至經(jīng)步驟S2處理之后的硅片的表面固定30分鐘，用PBST清洗，再用稀釋比為1:10的FBS封閉30分鐘，再用PBST清洗5分鐘。

進一步的，步驟S1中的H₂SO₄和H₂O₂混合溶液中的H₂SO₄和H₂O₂的體積比為3:1。

進一步的，步驟S2中的APTES和H₂SO₄混合液中APTES和H₂SO₄的體積比為1:15。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明的制作方法簡單，制作成本低，方便檢測甲胎蛋白，檢測時間短，檢測靈敏度高。

具體實施方式

為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點更加清楚明白，下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明作進一步的詳細說明，本發(fā)明的示意性實施方式及其說明僅用于解釋本發(fā)明，并不作為對本發(fā)明的限定。

實施例：

一種甲胎蛋白快速檢測玻片的制備方法，包括以下步驟：