[發明專利]一種海洋產蛋白酶芽孢桿菌穩定性保護劑

有效

• 申請號: 201910694814.2
• 申請日: 2019-07-30
• 公開（公告）號: CN110295113B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 顏琳;姚艷艷;常麗榮;閆欣;丁建姿;王振華
• 申請（專利權）人: 威海長青海洋科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/04
• 分類號: C12N1/04;C12R1/07
• 代理公司: 青島高曉專利事務所(普通合伙) 37104
• 代理人: 張曉波

本發明涉及一種海洋產蛋白酶芽孢桿菌穩定性保護劑，屬于微生物技術領域。該保護劑包括Tris?HCl緩沖液、甘油、甘露醇、EDTA、氯化鉀、硫酸鎂、磷酸氫二鈉、2?乙基己酸二苯基銻，所述的Tris?HCl緩沖液、甘油、甘露醇、EDTA、氯化鉀、硫酸鎂、磷酸氫二鈉、2?乙基己酸二苯基銻按一定比例配成液態保護劑。本發明的一種海洋產蛋白酶芽孢桿菌穩定性保護劑克服了海洋產蛋白酶芽孢桿菌菌種在低溫冷藏條件下變性、存活率低的問題，可使菌種存活率穩定在90%以上。

技術領域

本發明涉及微生物保存領域，尤其涉及一種海洋產蛋白酶芽孢桿菌穩定性的保護劑。

背景技術

隨著規模化、集約化水產養殖業的迅速發展，水產養殖病害頻繁發生。近年來，人們開始嘗試在養殖生產中使用有益微生物，尤其是海洋中的產酶益生菌，可以改善養殖生態環境，提高養殖動物的免疫力，抑制病原微生物，從而減少疾病的發生。其中，來源于海洋產蛋白酶的芽孢桿菌因其特有的產蛋白酶的性質，被開發出多種多樣的使用方式，可以直接加入養殖水體或添加到飼料中使用，也可以通過餌料生物作用于海水養殖動物，還可以通過注射或浸浴使用。

由于此類產蛋白酶芽孢桿菌來源于海洋，其生長存活條件應與海洋生態環境相似，但通常在實驗室模擬的環境條件下培養出的菌種在冷藏保存時會出現存活率低、活性下降等問題。因此，尋求一種能夠保持海洋產蛋白沒芽孢桿菌穩定性的保護劑是相關研究人員一直在探究的課題。

發明內容

本發明的目的是提供一種海洋產蛋白酶芽孢桿菌穩定性保護劑，利用該保護劑增強菌的活性并提高菌的存活率。

為實現上述技術目的，本發明采用的技術方案為：一種海洋產蛋白酶芽孢桿菌穩定性保護劑，其特征在于：該保保護劑通過向Tris-HCl緩沖液中添加甘油、甘露醇、EDTA、氯化鉀、硫酸鎂、磷酸氫二鈉及2-乙基己酸二苯基銻制作而成。

進一步的，所述Tris-HCl緩沖液是指10 mM Tris-HCl緩沖液，緩沖液的PH值為7.5。

進一步的，所述甘油的濃度為25-35%（v/v），所述甘露醇的濃度為5.5-7.5%（w/v）、所述EDTA的濃度為1.5-3.5%（w/v）、所述氯化鉀濃度為0.5-0.7%（w/v）、所述硫酸鎂濃度為0.35-0.55%（w/v）、所述磷酸氫二鈉濃度為0.25-0.45%（w/v）、所述2-乙基己酸二苯基銻的濃度為0.03-0.08%（v/v），上述各成分的濃度以保護劑的體積為基準計算。

進一步的，甘油的濃度為32%（v/v），所述甘露醇的濃度為5.5%（w/v）、所述EDTA的濃度為1.5%（w/v）、所述氯化鉀濃度為0.55%（w/v）、所述硫酸鎂濃度為0.35%（w/v）、所述磷酸氫二鈉濃度為0.32%（w/v）、所述2-乙基己酸二苯基銻的濃度為0.05%（v/v）。

進一步的，所述穩定劑制備方法如下：甘油、甘露醇、EDTA、氯化鉀、硫酸鎂、磷酸氫二鈉、2-乙基己酸二苯基銻按比例添加到10 mM Tris-HCl緩沖液（pH 7.5）的溶液中，在常溫下攪拌均勻，使溶質完全溶解，靜置10 min后，用10 mM Tris-HCl緩沖液（pH 7.5）的溶液定容。

本發明申請的一種海洋產蛋白酶芽孢桿菌穩定性保護劑，具體是在Tris-HCl緩沖液為基礎液中添加有甘油、甘露醇、EDTA、氯化鉀、硫酸鎂、磷酸氫二鈉、2-乙基己酸二苯基銻。其中，Tris-HCl緩沖液用于提供穩定的液態環境，使溶液的pH保持穩定，且pH7.6接近于海洋產蛋白酶芽孢桿菌在海水中的生長pH環境；甘油用于自由擴散到細胞內，降低細胞內的水活度，抑制菌株生化反應的進行；甘露醇用于平衡菌株細胞內外的滲透壓；EDTA作為螯合抗菌劑，用于抑制雜菌生長；氯化鉀、硫酸鎂、磷酸氫二鈉可提供海洋產蛋白酶芽孢桿菌在海洋環境中存活所需的無機鹽離子；2-乙基己酸二苯基銻能有效抑制菌種衰退，是一種重要的生物穩定劑。通過該保護劑的應用能夠極大提高蛋白酶芽孢桿菌的活性及存活率。

具體實施方式