[發明專利]一種鯉皰疹病毒Ⅱ型衣殼蛋白ORF66的原核表達、蛋白純化方法

在審

• 申請號: 201910687629.0
• 申請日: 2019-07-29
• 公開（公告）號: CN110407920A
• 公開（公告）日: 2019-11-05
• 發明（設計）人: 李強;欒林林
• 申請（專利權）人: 鹽城工學院
• 主分類號: C07K14/03
• 分類號: C07K14/03;C12N15/38;C12N15/66;C12N15/70;C07K1/34
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 吳爽

本發明首先公開了一種編碼鯉皰疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白的基因的核苷酸序列；然后公開了所述基因編碼的鯉皰疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白的氨基酸序列；接著公開了包含所述基因的重組載體，最后公開了一種鯉皰疹病毒Ⅱ型衣殼蛋白ORF66的原核表達、蛋白純化方法。到目前為止，尚未有人體外表達過鯉皰疹病毒（CyHV?2）ORF66蛋白，而本發明通過基因工程方法，首次成功表達純化了鯉皰疹病毒（CyHV?2）ORF66蛋白。

技術領域

本發明屬于生物工程技術領域，具體涉及一株鯉皰疹病毒Ⅱ型衣殼蛋白ORF66的基因克隆和原核表達、純化方法。

背景技術

鯽魚是我國淡水養殖的常見魚種，屬于鯉形目(Cypriniformes)，鯉科(Cyprinidae)，鯽屬(Carassius)。鯽魚(Crucian carp)飼養成本低,養殖地域廣,在中國淡水養魚上占有重要地位,中國鯽魚養殖主要集中在東部、中部和南部地區,如江蘇、湖北、江西、安徽、山東、廣東、四川、遼寧、湖南、浙江等省。據統計，鯽魚的養殖總產量已達到300多萬噸，約占全國淡水魚總養殖產量的12％。2013年中國鯽魚年產量達259.44萬噸,其中主要養殖品種為異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)。異育銀鯽具有生長快速、抗逆性強、肉質好的優點，深受人們的喜愛。然而，隨著養殖規模的逐漸擴大、集約化程度的不斷提高，異育銀鯽的病害問題日益突出。2012年，江蘇省鹽城地區養殖的異育銀鯽爆發了一種以“鰓出血”為主要癥狀的疾病，稱為鯽造血器官壞死病(俗稱“鰓出血病”)。該病具有發病急、傳播快、死亡率高的特點，嚴重威脅我國異育銀鯽養殖業發展。研究發現，鯉皰疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2，CyHV-2)是造成鯽造血器官壞死病的病原。

鯉科皰疹病毒II型，又稱為皰瘆造血器官壞死病毒(或金魚造血器官壞死病毒)。該病毒隸屬于皰疹病毒目(Herpesvirales)、魚皰疹病毒科(Alloherpesviridae)、鯉皰疹病毒屬 (Cyprinivirus)，CyHV-2與分離自鯉科魚類的另外兩種病毒鯉皰疹毒1(Cyprinidherpesvirus 1, CyHV-1)和鯉皰疹病毒3(Cyprinid herpesvirus 3,CyHV-3)親緣關系較近,與溝鲇皰疹病毒 (Ictalurid herpes-virus 1,IcHV-1)關系相對較遠。在病原學方面，CyHV-2具有魚類皰疹病毒的一般特征。病毒呈球形，具有二十面體立體對稱的衣殼結構，內部包有長度約為290,304bp 的雙股DNA，外面為皮質層和囊膜。現已確認，魚類皰疹病毒基因組含有12個核心ORF，這些編碼蛋白在CyHV-1和CyHV-3中均有分布，主要參與病毒復制、裝配以及衣殼的形成等過程。Jung等在1995年對CyHV-2進行了第一次報道，發現CyHV-2是金魚造血器官壞死病的致病病原。之后在美國、澳大利亞、中國臺灣、英國養殖的金魚也暴發該病。自從 2011年匈牙利首次在養殖的鯽魚體內檢測到CyHV-2后，近幾年來關于CyHV-2感染鯽魚的報道也逐漸增多,該病毒在中國、日本、美國、澳大利亞、英國、新西蘭等地廣泛傳播，造成養殖鯽魚和金魚大量死亡。這些報道均表明CyHV-2是一種新生養殖鯽魚病毒病，其發病區域在逐年擴大。CyHV-2病害已經引起我國水產養殖業管理部門及養殖戶高度重視。

發明內容

針對現在技術的不足，本發明第一個目的是提供一株鯉皰疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白的基因；本發明的第二個目的是提供鯉皰疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白基因編碼的蛋白質；本發明的第三個目的是提供一種鯉皰疹病毒Ⅱ型衣殼蛋白ORF66的原核表達、蛋白純化方法。

本發明解決其技術問題采用的技術方案是：

一株鯉皰疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白的基因，其核苷酸序列如SEQ IDNO：1所示。

上述鯉皰疹病毒Ⅱ型ORF66蛋白基因編碼的蛋白質，其氨基酸序列如SEQID NO.2所示相應的，本發明提供包含上述CyHV-2蛋白ORF66基因的重組載體和表達方法。