[發明專利]檢測變形桿菌屬及奇異變形桿菌的PCR引物、引物組、探針及其試劑盒和檢測方法

在審

• 申請號: 201910668124.X
• 申請日: 2019-07-23
• 公開（公告）號: CN110257540A
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發明（設計）人: 張茂俊;岳苑;顧一心
• 申請（專利權）人: 中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市蘭鋒盛世知識產權代理有限公司 44504
• 代理人: 羅炳鋒

本發明適用于細菌檢測技術領域，提供了一種檢測變形桿菌屬及奇異變形桿菌的PCR引物、引物組、探針及其試劑盒和檢測方法，公開了檢測變形桿菌屬及奇異變形桿菌的4個PCR引物的核苷酸序列，共2對，包含該引物組的試劑盒，具有特異性強的特性，同時，靈敏度高，檢測低限為10²CFU/mL，檢測結果準確可靠；無需對目的基因擴增產物進行電泳法檢測，操作簡單，檢測周期短，可以減少操作人員的工作量，及時獲取精確的檢測信息，大大簡化了變形桿菌檢測的流程，縮短檢測周期，可作為敏感的初篩手段，提高變形桿菌培養檢測的陽性率，可為我國今后制定食品中變形桿菌衛生學指標提供有力的技術支撐。

技術領域

本發明屬于細菌檢測技術領域，尤其涉及一種檢測變形桿菌屬及奇異變形桿菌的PCR引物、引物組、探針及其試劑盒和檢測方法。

背景技術

變形桿菌為無莢膜、無芽孢、有鞭毛和有菌毛的革蘭氏陰性桿菌，其廣泛分布于自然界、動物糞便、臨床標本以及人和動物的腸道內，是導致人和動物感染的重要條件致病菌。近年來，變形桿菌感染流行趨勢不斷擴大。根據有關文獻報道的變形桿菌屬引起食物中毒的統計結果表明，我國變形桿菌屬食物中毒呈逐年上升趨勢。除引起食物中毒外，變形桿菌屬還可引發多種感染，如呼吸道感染、泌尿道感染、創傷及燒傷感染、肺炎、腸炎、慢性中耳炎、腦膜炎、腹膜炎、敗血癥、風濕關節炎、肺結核等。其中變形桿菌屬是泌尿道感染的最主要病原菌之一。因此，對變形桿菌屬的快速診斷和防控應引起足夠重視。

目前，國內外變形桿菌定量的檢測方法主要依靠傳統的生化鑒定法和普通PCR法，傳統方法要經過增菌培養、分離純化、生化反應、血清學試驗等過程，存在檢測過程操作繁瑣，耗時較長，花費高，對培養基的要求高，條件不同的實驗室之間檢測的靈敏度存在較大的差異性，不易評價和質量控制等缺點。普通PCR技術雖然檢測準確、快速且成本較低，但目的基因擴增后需要電泳，費時且易損害檢測人員的健康。

由此可見，現有技術的變形桿菌定量的檢測方法存在操作繁瑣、耗時較長，檢測靈敏度低以及安全隱患問題。

發明內容

本發明實施例的目的在于提供檢測變形桿菌屬及奇異變形桿菌的PCR引物，旨在解決現有技術的變形桿菌定量的檢測方法存在操作繁瑣、耗時較長，檢測靈敏度低以及安全隱患問題。

本發明實施例是這樣實現的，檢測變形桿菌屬及奇異變形桿菌的PCR引物，引物序列為SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4；或者為所述引物序列的核苷酸互補序列；

所述引物的核苷酸序列如下所示：

SEQ ID NO:1 AAGTATACGAAGCGTCCCTACG，

SEQ ID NO:2 CGTCTGCCACGGCTTAAAC，

SEQ ID NO:3 CGGGTACCCTGTGGTAATG，

SEQ ID NO:4 CTGTTCGCGGATTATTTGTT。

本發明實施例的另一目的在于檢測變形桿菌屬及奇異變形桿菌的PCR引物組，引物組為引物組1或引物組2；

其中，引物組1由引物序列SEQ ID NO:1以及SEQ ID NO:2組成；或者由所述引物序列的核苷酸互補序列組成；

引物組2由引物序列SEQ ID NO:3以及SEQ ID NO:4組成；或者由所述引物序列的核苷酸互補序列組成。

本發明實施例的另一目的在于檢測變形桿菌屬及奇異變形桿菌的PCR檢測探針，探針序列如下所示：

SEQ ID NO:5 ACAGTTAAAGTTCAGCAGGCGGTGGTAT，

SEQ ID NO:6 TACCCCACAGTCCCGGTATTTGGAA；