[發明專利]高三尖杉酯堿在治療乳腺腫瘤中的應用

在審

• 申請號: 201910666906.X
• 申請日: 2019-07-23
• 公開（公告）號: CN110251520A
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發明（設計）人: 王立斌;王丹妮
• 申請（專利權）人: 寧夏醫科大學總醫院
• 主分類號: A61K31/55
• 分類號: A61K31/55;A61K36/13;A61P35/00;A61P35/04
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363
• 代理人: 逯長明;許偉群

本申請公開高三尖杉酯堿在治療乳腺腫瘤中的應用。本申請證明高三尖杉酯堿對乳腺腫瘤細胞增殖轉移有抑制作用且具有治療乳腺腫瘤的功能。本申請發現高三尖杉酯堿能夠明顯抑制兩種乳腺癌細胞MDA?MB?231和MCF?7細胞的增殖及細胞集落形成，還能明顯抑制兩種乳腺癌細胞遷移能力；高三尖杉酯堿作用后細胞出現明顯的凋亡形態學改變，細胞凋亡比率明顯上升；高三尖杉酯堿能抑制小鼠體內乳腺癌瘤體的大小，抑制瘤體增殖。本申請研究高三尖杉酯堿對乳腺癌細胞增殖、遷移及凋亡的影響，高三尖杉酯堿具有治療乳腺腫瘤的功能。

技術領域

本申請涉及腫瘤分子生物學技術領域，特別涉及高三尖杉酯堿在治療乳腺腫瘤中的應用。

背景技術

乳腺癌的治療手段主要包括手術切除、放射線照射以及化療藥物治療。然而，由于目前手術切除造成乳房的缺失和損傷也限制了其在臨床中的發展，靶向治療藥物是一種特異性很強的療法，篩選好的藥物與治療位點是我們研究的關鍵領域。目前，臨床靶向治療藥物主要通過誘導腫瘤細胞凋亡發揮抗腫瘤效應，現有大部分化療藥物的抗癌機制與腫瘤細胞凋亡密切相關。

高三尖杉酯堿(Homoharringtonine，HHT)是天然有效的細胞周期非特異性抗腫瘤植物堿，來源于紅豆杉科尖杉屬的一種植物，分子式為C₂₉H₃₉NO₉，分子量為545.631。其由于價格低廉和效果顯著已被臨床用于治療白血病超過30年，主要通過抑制真核細胞的蛋白質合成，干擾多聚體形成的早期階段，影響真核細胞DNA的合成，誘導白血病細胞凋亡來發揮抗腫瘤作用。目前臨床多用于ALL(急性淋巴細胞白血病)或CML(慢性粒細胞白血病)的治療。

發明內容

本申請的目的在于提供高三尖杉酯堿在治療乳腺腫瘤中的應用。

本申請提供高三尖杉酯堿在抑制乳腺腫瘤細胞增殖轉移中的應用。

本申請提供高三尖杉酯堿在抑制乳腺腫瘤細胞增殖轉移或治療乳腺腫瘤藥物中的應用。

進一步地，所述藥物的劑型包括軟膠囊、滴丸、乳劑、片劑、洗劑、搽劑、軟膏劑或栓劑。

本申請發現高三尖杉酯堿影響乳腺癌細胞增殖、遷移及凋亡，高三尖杉酯堿藥物具有臨床治療乳腺腫瘤的功能。所選細胞系為三陰乳腺癌細胞株MDA-MB-231、HCC1937和ER(+)乳腺癌細胞株MCF-7、T47D。

本申請高三尖杉酯堿作用對三陰性乳腺癌細胞較ER(+)乳腺癌細胞敏感，對人乳腺癌細胞株MDA-MB-231最敏感，且呈時間和濃度依賴，篩選高三尖杉酯堿作用各乳腺癌細胞的處理最佳時間為48h，藥物半數抑制濃度(IC50)為0.313μg/mL。

本申請通過CCK-8和平板克隆形成實驗發現高三尖杉酯堿能夠明顯抑制兩種乳腺癌細胞MDA-MB-231和MCF-7細胞的增殖及細胞集落形成。

本申請通過劃痕實驗發現高三尖杉酯堿能明顯抑制兩種乳腺癌細胞遷移能力。

本申請通過流式細胞術實驗發現高三尖杉酯堿作用后細胞出現明顯的凋亡形態學改變，細胞凋亡比率明顯上升。

本申請通過Real-time PCR、Western blot檢測凋亡相關mRNA和蛋白表達，結果發現：與對照組相比，高三尖杉酯堿作用后Bcl-2凋亡基因的表達顯著下調，Bax、Caspase3凋亡基因的表達均顯著上調；同時HHT組Bcl-2、pro-Caspase3、PARP蛋白表達明顯降低，而Cleaved-caspase3、Cleaved-PARP、Bax蛋白表達顯著升高。

本申請通過體內實驗，檢測高三尖杉酯堿對瘤體的影響，結果發現高三尖杉酯堿能抑制小鼠體內乳腺癌瘤體的大小，抑制瘤體增殖。