[發明專利]臍帶間充質干細胞膜片及其制備方法

在審

• 申請號: 201910665628.6
• 申請日: 2019-07-23
• 公開（公告）號: CN111621475A
• 公開（公告）日: 2020-09-04
• 發明（設計）人: 靳新;常德華;高爽;趙玉菲;王娟;譚玉琴;李志生
• 申請（專利權）人: 京東方科技集團股份有限公司;京東方再生醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李程達

1.一種制備臍帶間充質干細胞膜片的方法，包括：

在溫敏培養皿表面包被一層基質；

將臍帶間充質干細胞的細胞懸液加入溫敏培養皿中進行培養；

降低溫度，臍帶間充質干細胞及其分泌的細胞外基質成片層狀脫離，得到臍帶間充質干細胞膜片。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述包被基質選自血清、膠原、明膠、纖連蛋白，玻連蛋白，層粘連蛋白，多聚鳥氨酸，多聚賴氨酸。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其中所述包被基質濃度是30～100％(v/v)。

4.根據權利要求1-3任一項所述的方法，其中包被溫度是20-40℃。

5.根據權利要求1-4任一項所述的方法，其中包被時間為0.5～48h。

6.根據權利要求1-5任一項所述的方法，其中包被比例不少于0.1ml FBS/cm²。

7.根據權利要求1-6任一項所述的方法，其中：

將臍帶間充質干細胞的單細胞懸液以5×10⁵-2×10⁶個細胞/cm²的密度加入所述溫敏培養皿中，培養約4～24h；或者，

將臍帶間充質干細胞的單細胞懸液以1×10³-1×10⁶個細胞/cm²的密度加入所述溫敏培養皿中，培養約24～168h。

8.根據權利要求1-7任一項所述的方法，其中所述細胞膜片未經分散劑處理而從培養皿剝離。

9.根據權利要求1-7任一項所述的方法，其中所述細胞膜片未經刮擦處理而從培養皿剝離。

10.根據權利要求1-9任一項所述的方法，其中所述溫敏培養皿表面涂覆了一層溫度敏感性高分子物質，該高分子物質的親疏水性能夠隨溫度變化而變化。

11.通過權利要求1-10任一項的方法制備的臍帶間充質干細胞膜片。

12.根據權利要求11所述的臍帶間充質干細胞膜片，其基本上保留了臍帶間充質干細胞分泌的所有細胞外基質。

13.根據權利要求11或12所述的臍帶間充質干細胞膜片，其中所制備的臍帶間充質干細胞膜片具備以下特征中的一項或多項：

(i)所述臍帶間充質干細胞膜片內的細胞密度為約0.025×10⁶-25×10⁶；

(ii)所述臍帶間充質干細胞膜片包含1-120層細胞；

(iii)所述臍帶間充質干細胞膜片的厚度為約20-5000μm。

14.根據權利要求11-13任一項所述的臍帶間充質干細胞膜片，其中所述臍帶間充質干細胞膜片能夠至少分泌IL-6、HGF和VEGF。

15.根據權利要求11-14任一項所述的臍帶間充質干細胞膜片，其中所述臍帶間充質干細胞膜片中的細胞外基質至少包含纖連蛋白(Fibronectin)、整聯蛋白族、玻連蛋白。

16.一種分離培養臍帶間充質干細胞的方法，其包括以下步驟：

(1)從臍帶組織分離華通氏膠；

(2)將所述華通氏膠切碎以獲得組織塊；

(3)將所述組織塊鋪于培養容器中進行培養；

(4)加入適量的完全培養基覆蓋組織塊，并繼續培養；

(5)當所述組織塊周圍出現附著于培養容器的細胞且所述細胞長至70～100％匯合時，移除所述組織塊，并對細胞進行傳代操作。