[發明專利]一種直投式蛭弧菌發酵劑及其制備方法和使用方法

在審

• 申請號: 201910664652.8
• 申請日: 2019-07-23
• 公開（公告）號: CN110241057A
• 公開（公告）日: 2019-09-17
• 發明（設計）人: 文傳敬;謝荔朋
• 申請（專利權）人: 福建九為生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C02F3/34;C12R1/63;C02F103/20
• 代理公司: 廈門創象知識產權代理有限公司 35232
• 代理人: 吳慧敏

1.一種直投式蛭弧菌發酵劑，其特征在于：蛭弧菌凍干菌種團塊、宿主菌團塊按比例粉碎后，將粉碎后的混合物與蛭弧菌液體發酵營養鹽按比例混合，抽真空密封保存，即為直投式蛭弧菌發酵劑。

2.如權利要求1所述的一種直投式蛭弧菌發酵劑，其特征在于：蛭弧菌凍干菌種團塊、宿主菌團塊與蛭弧菌液體發酵營養鹽三種物料的重量比為1:0.01～1.0：10～150。

3.如權利要求1所述的一種直投式蛭弧菌發酵劑，其特征在于：所得直投式蛭弧菌發酵劑定量填充于西林瓶或輸液瓶或塑料袋中，所述的定量填充的重量范圍為1～200克，抽真空密封，即為一常規份量的直投式蛭弧菌發酵劑。

4.如權利要求1所述的一種直投式蛭弧菌發酵劑，其特征在于：所述蛭弧菌凍干菌種團塊為蛭弧菌屬的多種或任一種制成的菌種團塊。

5.如權利要求1所述的一種直投式蛭弧菌發酵劑，其特征在于：所述宿主菌團塊為大腸桿菌種、弧菌屬、志賀氏菌屬、氣單胞菌屬中任意一種所制成的宿主菌團塊。

6.如權利要求1所述的一種直投式蛭弧菌發酵劑，其特征在于：所述蛭弧菌液體發酵營養鹽為氯化鈉、氯化鈣、氯化鎂、氫氧化鈉按重量比范圍為1:0.001～0.2:0.001～0.4：0.01～0.04混合粉碎干燥后所得。

7.一種直投式蛭弧菌發酵劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一：滅活宿主菌懸液的制備：以常規微生物無菌接種操做，將宿主菌接種于NB液體培養基中，搖床培養24小時后離心去掉發酵液培養基，將獲得的宿主菌菌泥以等體積的滅菌蒸餾水稀釋，將稀釋后的宿主菌菌濃懸液經100℃的水浴滅活處理10min，即為滅活宿主菌懸液；

步驟二：蛭弧菌固體培養物的制備：將一定量的凝固劑加入氯化鈉含量為2％的鹽水中，煮沸溶解，即為蛭弧菌固體培養基；將蛭弧菌固體培養基滅菌后置于45℃的水浴鍋中備用；取保存的蛭弧菌軟瓊脂菌種一只，加入蒸餾水后搖勻靜置2小時，上清液即為蛭弧菌菌種浸出液；無菌操作下將步驟一制備的滅活宿主菌懸液與蛭弧菌菌種浸出液按1:0.1～1.0的比例均勻混合于蛭弧菌固體培養基中，然后倒入平板中25～28℃培養至平板中的固體培養基由渾濁轉為透明，即為培養成熟的蛭弧菌固體培養物；

步驟三：蛭弧菌凍干菌種團塊的制備：將步驟二制備的蛭弧菌固體培養物按比例加入硅藻土、甘露聚糖、二甲基亞砜等保護劑，混合均勻，真空冷凍干燥至物料含水量為1％～12％時，即得蛭弧菌凍干菌種團塊；

步驟四：宿主菌團塊的制備：將步驟一制備的滅活宿主菌懸液真空干燥至物料含水量為1％～12％時，即得宿主菌團塊；

步驟五：蛭弧菌液體發酵營養鹽的制備：將氯化鈉、氯化鈣、氯化鎂、氫氧化鈉按比例投入粉碎機中，以0.6～0.8毫米的篩網孔徑粉碎過篩后，干燥至含水量為1％～12％，即為蛭弧菌液體發酵營養鹽；

步驟六：直投式蛭弧菌發酵劑的制備：將步驟三、步驟四制備的蛭弧菌凍干菌種團塊、宿主菌團塊按比例投入低溫粉碎機粉碎，將粉碎后的混合物與步驟五制備的蛭弧菌液體發酵營養鹽按一定比例混合，定量填充于西林瓶或輸液瓶或塑料袋中，抽真空密封后，即為直投式蛭弧菌發酵劑。

8.根據權利要求7所述的一種直投式蛭弧菌發酵劑的制備方法，其特征在于，步驟一中使用的宿主菌為大腸桿菌、弧菌屬、志賀氏菌屬、氣單胞菌屬中任意一種。

9.根據權利要求7所述的一種直投式蛭弧菌發酵劑的制備方法，其特征在于：步驟二中所述的蛭弧菌軟瓊脂菌種中使用的菌種為蛭弧菌屬的一種或多種。

10.根據權利要求7所述的一種直投式蛭弧菌發酵劑的制備方法，其特征在于：步驟二中制備蛭弧菌固體培養物所使用的鹽水與凝固劑的比例為每1000毫升加入5～100克的凝固劑。