[發明專利]抗體功能化的負載吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅納米顆粒的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201910659840.1
• 申請日: 2019-07-22
• 公開（公告）號: CN110261604B
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 夏寧;劉林;鄧德華;邢云;孫婷;黃雅亮
• 申請（專利權）人: 安陽師范學院
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 安陽金泰專利代理事務所(普通合伙) 41150
• 代理人: 王暉

抗體功能化的負載吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅納米顆粒的制備方法，所述制備方法為：將聚乙烯亞胺包裹的中孔二氧化硅納米顆粒加入到將含有吡咯喹啉醌的磷酸緩沖溶液，震蕩12小時左右；然后加入含有檢測抗體的磷酸緩沖溶液，繼續震蕩反應1小時左右，離心洗滌，下層沉淀分散于磷酸緩沖溶液，于4℃下保存備用；使用前，用含有牛血清白蛋白的磷酸緩沖溶液稀釋。抗體功能化的負載吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅納米顆粒的應用，所述的抗體功能化的負載吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅納米顆粒用于抗原檢測。本發明簡單靈敏、直觀、高通量、不需要特殊儀器等優點。

技術領域

本發明涉及免疫分析檢測，特別涉及一種用于免疫分析檢測的抗體功能化的負載吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅納米顆粒及檢測方法，屬于化學領域。

背景技術

可視化免疫分析法具有操作簡單、不需要特殊儀器等特點，在各種疾病的預防、診斷和治療中受到了廣泛的關注。目前，標準化的可視化免疫分析法通常使用酶標記的抗體來催化顯色反應，進而達到定量分析的目的。然而，在實際應用中，天然酶存在諸多問題，比如熱穩定性差、易受環境影響、制備和純化費用高、靈敏度低等。

隨著納米科技與納米材料的發展，基于納米材料的可視化免疫分析法的靈敏度和穩定性得到了顯著提升。一般來說，納米材料在可視化免疫分析實驗中的作用可以分為四種類型：作為納米酶催化顯色反應；作為顯色底物，通過目標分子引起納米材料聚集或形貌尺寸的變化；作為載體，負載大量的天然酶或者顯色劑；作為前驅體，釋放出能夠催化顯色反應的金屬離子。其中，納米酶具有成本低、催化活性可控、穩定性高等優點。納米酶主要包括碳、金屬和金屬氧化物等納米材料。在葡萄糖和過氧化氫的催化反應中，它們通常發揮類似于氧化酶、過氧化氫酶或歧化酶的功能。基于納米酶的免疫分析方法簡單有效，但是，納米酶在可視化免疫分析的實際應用方面仍存在著一些問題。例如，相比于天然酶，大部分納米酶具有較低的催化活性，弱的結合力和較差的底物特異性。在實驗過程中，需要對納米材料的表面進行修飾，從而進行分子識別和降低非特異性吸附。然而，這些修飾成分通常會降低納米酶（特別是金屬和金屬氧化物類納米材料）的催化活性。因此，構建用于可視化免疫分析的新型納米酶或納米催化體系具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于克服目前的抗原檢測方法中存在的上述缺陷，提供一種抗體功能化的負載吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅納米顆粒的制備方法及應用。

為實現本發明的目的，采用了下述的技術方案：抗體功能化的負載吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅納米顆粒的制備方法，所述制備方法為：將聚乙烯亞胺包裹的中孔二氧化硅納米顆粒加入到將含有吡咯喹啉醌的磷酸緩沖溶液，震蕩12小時左右；然后加入含有檢測抗體的磷酸緩沖溶液，繼續震蕩反應1小時左右，離心洗滌，下層沉淀分散于磷酸緩沖溶液，于4 ℃下保存備用；使用前，用含有牛血清白蛋白的磷酸緩沖溶液稀釋。

進一步的；所述的聚乙烯亞胺包裹的中孔二氧化硅納米顆粒采用以下方法制備：

A：中孔二氧化硅納米顆粒的制備：將十六烷基三甲基溴化銨溶解于超純水中，然后加入氫氧化鈉溶液，于80 ℃下攪拌反應15 min，再緩慢加入四乙氧基硅烷溶液，劇烈攪拌20 min，將得到的白色沉淀抽濾，用水和甲醇依次洗滌，再于80 ℃下干燥；干燥后的固體分散于鹽酸和甲醇的混合溶液中，回流反應12小時左右，再次用水和甲醇洗滌，在60 ℃下進行真空干燥，即得到中孔結構的二氧化硅納米顆粒；

B：聚乙烯亞胺包裹的中孔二氧化硅納米顆粒的制備：即將步驟（1）中制備得到的中孔二氧化硅納米顆粒加入到聚乙烯亞胺水溶液中，攪拌反應12小時左右，離心洗滌，在60℃下進行真空干燥。

抗體功能化的負載吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅納米顆粒的應用，所述的抗體功能化的負載吡咯喹啉醌的中孔二氧化硅納米顆粒用于抗原檢測。