[發明專利]一種具有護肝功能雞骨草多糖的制備方法

在審

• 申請號: 201910658896.5
• 申請日: 2019-07-22
• 公開（公告）號: CN110283258A
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 蔣德旗;陳曉白;蔣麗林
• 申請（專利權）人: 玉林師范學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P1/16
• 代理公司: 廣州海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 王洪娟;馬赟齋

本發明公開了一種具有護肝功能雞骨草多糖的制備方法，涉及天然產物多糖提取分離及應用，旨在解決現有技術雞骨草多糖得率及純度不高的技術問題。所述雞骨草多糖的制備方法包括提取、除蛋白和脫色、大孔樹脂柱層析、超濾以及醇沉干燥的步驟，所述提取步驟之前還包括超聲波?復合酶前處理步驟。本發明首次使用超聲波?復合酶法結合超高壓技術提取雞骨草多糖，復合酶中纖維素酶和木聚糖酶能破壞細胞壁，利于多糖充分溶出。本發明制備的雞骨草多糖，得率與純度高，具有良好的肝臟保護作用，并確定具有護肝功能活性多糖的分子量范圍。

技術領域

本發明涉及天然產物多糖的提取方法，更具體地說，涉及一種具有護肝功能雞骨草多糖的制備方法。

背景技術

雞骨草屬嶺南道地藥材，臨床常用中藥，也是我國主要出口中草藥品種，藥典規定其來源為豆科植物廣州相思子(Abrus cantoniensis Hance)的干燥全株。雞骨草含有黃酮類、多糖類、生物堿類及皂苷等多種化學成分。現代藥理學研究表明雞骨草具有多種藥理活性，包括保肝護肝、抗氧化、抗炎、降血脂、抗病毒、抗腫瘤等。雞骨草已是多種中成藥的主要原料，現已被開發成多種中成藥制劑，如玉林制藥生產的雞骨草丸與雞骨草膠囊，廣州環葉制藥生產的雞骨草肝炎沖劑等，也是兩廣地區的主要創匯藥材。臨床廣泛用于治療急慢性肝炎、肝硬化、膽囊炎等疾病，療效顯著且毒副作用小。

研究表明復方雞骨草膠囊對四氯化碳、D-氨基半乳糖引起的小鼠急性化學性肝損傷均有明顯的保護作用，保肝效應和臨床用雞骨草膠囊相當。雞骨草總黃酮對四氯化碳所致肝損傷動物模型有保護作用，其機制可能與抑制氧自由基生成有關。雞骨草還能降低高脂模型大鼠血脂和肝脂水平，具有一定降血脂、抗脂肪肝作用。

天然植物多糖具有多種生物活性，相比化學合成藥物具有毒副作用小等優點，近年來受到研究者們的青睞，成為臨床藥物研發的新寵。研究證實沙棘多糖、狗肝菜多糖對急性肝損傷具有一定的緩解作用。雞骨草護肝作用已明確，但具體是哪些活性成分發揮作用還未知，多糖為雞骨草主要有效成分，但其是否發揮保肝護肝作用，也還不清楚，目前有關雞骨草多糖的藥理活性研究很少，僅少數初步探討了雞骨草多糖的體外自由基清除作用。另外，多糖的生物活性與其分子量密切相關，即使是同一來源的多糖，不同分子量的多糖具有不同的生物活性。目前亦無文獻對雞骨草護肝活性多糖的分子量范圍進行研究。

雞骨草含有一定量的多糖成分，提取多使用超聲波、微波、水提醇沉法，這些方法多糖得率較低(約5.4％左右)，且工藝較復雜。專利公開號為CN103254325A的發明專利公開了一種雞骨草多糖的制備方法：對傳統工藝進行改良，采取熱水回流浸提、中性蛋白酶除蛋白、透析袋透析后濃縮醇沉，獲得提取率為6～10％的雞骨草多糖，該方法未能充分利用雞骨草多糖，提取率較低。專利公開號為CN107915786A的發明專利公開了一種提取雞骨草多糖的方法：將雞骨草粉末與離子液體1-烷基-3-甲基咪唑氯鹽、1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽混勻，然后微波提取，提取液經活性炭吸附脫色，再經中性蛋白酶酶解、乙醇反復沉淀后低溫真空干燥制得雞骨草多糖，該方法多糖提取率有一定程度提升，約15％左右，但以上提取方法均沒有分離純化步驟，獲得的雞骨草多糖純度還不能滿足藥物制劑或保健品添加劑的要求，限制了雞骨草資源的進一步開發。此外，文獻《雞骨草多糖的酶法提取工藝優化及其抗氧化活性，食品工業科技，2019，40(3):153-158》報道了單用纖維素酶酶解提取雞骨草多糖的方法，獲得的多糖具有較好的體外抗氧化活性，但目前尚未發現采用復合酶法進行雞骨草多糖提取的相關研究。

探索雞骨草多糖的提取純化工藝和保肝護肝藥理作用，研究結果可促進雞骨草的臨床使用和出口，可為進一步開發、利用雞骨草這一珍貴中草藥資源奠定基礎，為研發出有效成分和藥理作用明確、質量可控、療效顯著的雞骨草相關藥品提供一定的參考依據。

發明內容

本發明的第一個目的在于提供一種具有護肝功能雞骨草多糖的制備方法，該方法獲得的多糖得率和純度高，具有較高生物活性，工藝適合于大規模生產。