[發明專利]一種5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸的高效液相色譜檢測方法

有效

• 申請號: 201910658599.0
• 申請日: 2019-07-19
• 公開（公告）號: CN112240915B
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 林峰
• 申請（專利權）人: 杭州盛弗泰新材料科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/24
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司 33109
• 代理人: 俞潤體;何俊

本發明涉及高效液相色譜檢測技術領域，公開了一種5?氨基?1H?1，2，4?三氮唑?3?羧酸的高效液相色譜檢測方法，包括：1）稱取5?氨基?1H?1，2，4?三氮唑?3?羧酸樣品并將其添加至硫酸水溶液中，超聲震蕩，使樣品溶解至無色透明，得到樣品溶液；2）取樣品溶液用流動相稀釋定容，超聲處理；所述流動相為0.18?0.22wt%的戊烷磺酸鈉溶液和乙腈的混合溶液；3)對步驟3）所得溶液自動進樣，進行高效液相色譜檢測，獲得結果。本發明采用高效液相色譜法對產品進行定量檢測，具有靈敏度高、快速分離、準確定量，分離度良好、檢測時間短等優點，克服了滴定分析不準確的缺點，所得到的峰形好，樣品線性好。

技術領域

本發明涉及高效液相色譜檢測技術領域，尤其涉及一種5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3- 羧酸的高效液相色譜檢測方法。

背景技術

5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸是合成抗病毒藥物利巴韋林的一個重要的中間體。目前國內對其含量的主要分析方法有以下幾種：

(1)針對其氨基采用高氯酸滴定法。其步驟和原理為：

步驟：精確稱取5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸0.1g，加冰乙酸30mL，加熱回流至溶解，冷卻到室溫。加α-萘酚苯甲醇指示劑2滴，用0.1mol/L高氯酸滴定至顯綠色即為終點。同時做空白校對。(每1mL高氯酸相當于12.8mg環合物)。

原理：產品中含有氨基和羧基，溶解在冰乙酸中時顯示堿性較多，可以用高氯酸滴定檢測含量。

(2)針對其羧基采用的鹽酸的滴定法。其步驟和原理為：

步驟：稱取樣品置于燒杯中，用移液管移取氫氧化鈉標準溶液，加熱使之完全溶解，靜置 45min，加入酚酞指示劑，用0.1mol/L的鹽酸溶液滴定至紅色褪去，記錄數據，同時做空白試驗，同時記錄消耗鹽酸的體積。

原理：產品中含有羧基，利用酸堿中和的原理。

總體來說，由于5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸難以溶于大部分的溶劑，所以現有技術中都采用了滴定的方法。但由于滴定試劑準確度和5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸中影響滴定的雜質基團的影響，造成含量或多或少存在偏差影響后續產品的質量控制。因此有必要開發出一種精準性更好的新檢測方法。

發明內容

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸的高效液相色譜檢測方法，本發明采用高效液相色譜法對產品進行定量檢測，具有靈敏度高、快速分離、準確定量，分離度良好、檢測時間短等優點，克服了滴定分析不準確的缺點，所得到的峰形好，樣品線性好。

本發明的具體技術方案為：一種5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸的高效液相色譜檢測方法，包括以下步驟：

1)稱取5-氨基-1H-1，2，4-三氮唑-3-羧酸樣品并將其添加至硫酸水溶液中，超聲震蕩，使樣品溶解至無色透明，得到樣品溶液。

2)取樣品溶液用流動相稀釋定容，超聲處理；所述流動相為0.18-0.22wt％的戊烷磺酸鈉溶液和乙腈的混合溶液。

3)對步驟3)所得溶液自動進樣，進行高效液相色譜檢測，獲得結果。

本發明首先對樣品進行衍生化，然后再進行高效液相色譜，在特定的檢測條件下，本發明方法的可重復性好，保證了產品的準確定性定量。

本發明衍生化的原理為利用硫酸將產品制成硫酸鹽，使其易溶于以水相為主的流動相中，其他含有氨基的雜質也可以生成硫酸鹽，在色譜柱內進行分離。