[發明專利]一種可信號特異放大的二氧化錳/核酸探針復合納米探針及其制備方法、應用

在審

• 申請號: 201910655848.0
• 申請日: 2019-07-19
• 公開（公告）號: CN110904224A
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 田華雨;燕楠;徐彩娜;林琳;陳學思
• 申請（專利權）人: 中國科學院長春應用化學研究所
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/682;A61K49/00
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 劉偉

1.一種二氧化錳/核酸探針復合納米材料，其特征在于，包括二氧化錳、陽離子聚合物和核酸探針；

所述核酸探針由雙鏈DNA分子和單鏈DNA分子組成。

2.根據權利要求1所述的復合納米材料，其特征在于，所述復合納米材料為復合納米探針；

所述單鏈DNA復合在所述二氧化錳上；

所述雙鏈DNA與所述陽離子聚合物相復合；

所述陽離子聚合物復合在所述二氧化錳上。

3.根據權利要求1所述的復合納米材料，其特征在于，所述陽離子聚合物包括聚乙烯亞胺、咪唑改性聚乙烯亞胺、聚賴氨酸和咪唑改性聚賴氨酸中的一種或多種；

所述陽離子聚合物的分子量為600～30000Da；

所述二氧化錳與單鏈DNA的質量比為(1～200)：1；

所述陽離子聚合物與雙鏈DNA的質量比為(1～20)：1；

所述雙鏈DNA與單鏈DNA的質量比為1：(0.1～10)。

4.根據權利要求1所述的復合納米材料，其特征在于，所述二氧化錳包括二氧化錳納米片和/或二氧化錳納米球；

所述二氧化錳的尺寸為100～250nm；

所述核酸探針用于檢測microRNA；

所述單鏈DNA為信號放大鏈；所述雙鏈DNA為信號報告鏈。

5.根據權利要求4所述的復合納米材料，其特征在于，所述microRNA包括microRNA-21、microRNA-221和microRNA-155中的一種或多種；

所述雙鏈DNA通過靜電作用復合在所述陽離子聚合物上；

所述單鏈DNA通過多種非共價鍵復合在所述二氧化錳上；

所述陽離子聚合物與所述二氧化錳的復合方式包括絡合；

所述核酸探針為針對腫瘤細胞中高表達的microRNA設計的核酸探針。

6.根據權利要求1～5任意一項所述的復合納米材料，其特征在于，所述單鏈DNA的序列包括CTTATCAGACTGATGTTGATTGG、CTTATCAGACTGATGTTGATTGGT、CTTATCAGACTGATGTTGATTGGA、CTTATCAGACTGATGTTGATTGGAT和CTTATCAGACTGATGTTGATTGGTA中的一種或多種；

所述雙鏈DNA分子由標記熒光分子的第一單鏈DNA和標記淬滅團的第二單鏈DNA組成；

所述第一單鏈DNA的序列包括TATCAGACTGATGTTGATTGG、TATCAGACTGATGTTGATTGGT、TATCAGACTGATGTTGATTGGA、TATCAGACTGATGTTGATTGGAT和TATCAGACTGATGTTGATTGGTA中的一種或多種；

所述第二單鏈DNA的序列包括CCAATCAACATCAGTCTGATAAGCTA、ACCAATCAACATCAGTCTGATAAGCTA、TCCAATCAACATCAGTCTGATAAGCTA、ATCCAATCAACATCAGTCTGATAAGCTA和TACCAATCAACATCAGTCTGATAAGCTA中的一種或多種；

所述雙鏈DNA分子的組成方式包括堿基互補配對。

7.一種二氧化錳/核酸探針復合納米材料的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將二氧化錳與緩沖液混合，然后與單鏈DNA均勻混合后，第一混合物；

將陽離子聚合物與緩沖液進行第一混合，再與雙鏈DNA進行渦旋混合后，得到第二混合物；

2)將上述步驟得到的第一混合物和第二混合物進行均勻混合后，得到二氧化錳/核酸探針復合納米材料。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述緩沖液包括三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液和/或4-羥乙基哌嗪乙磺酸-鹽酸緩沖液；

所述渦旋混合的時間為10～30秒；

所述緩沖液的pH值為7.2～8.5；

所述均勻混合后還包括靜置步驟；

所述靜置的時間為5～40分鐘。