[發明專利]ELMO1基因甲基化檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201910654511.8
• 申請日: 2019-07-19
• 公開（公告）號: CN110423814A
• 公開（公告）日: 2019-11-08
• 發明（設計）人: 孫喜元
• 申請（專利權）人: 江蘇元丞生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427
• 代理人: 陳娟

本發明發現了可以用于結直腸癌診斷的生物標志物，提供了一種可以用于結直腸癌檢測的試劑，該試劑可以用于結直腸癌診斷的診斷中。本發明的ELMO1基因甲基化檢測試劑盒,ELMO1基因甲基化檢測試劑盒包含ELMO1基因甲基化特異性引物和ELMO1基因甲基化特異性熒光探針，ELMO1基因甲基化特異性引物為VAV3_F和VAV3_R，ELMO1_F序列如SEQ ID No.1:5’?GTCGTCGGAGTTTTGATCGTC?3’；ELMO1_R序列如SEQ ID No.2:5’?CCCCTCCCCTACCGCGCCGA?3’；ELMO1基因甲基化特異性熒光探針序列如SEQ ID No.3:5’?AACGAATCGAAACGCGACGCCA?3’。

技術領域

本發明屬于分子和細胞生物學領域，特別涉及基因甲基化檢測。

背景技術

GDNF家族受體α-1(GFRα1)，也被稱為GDNF受體，是一種蛋白質，在人中由GFRA1基因編碼，GFRA1被認為是原癌基因。

而結腸直腸癌(carcinoma of colon and rectum)胃腸道中常見的惡性腫瘤，早期癥狀不明顯，隨著癌腫的增大而表現排便習慣改變、便血、腹瀉、腹瀉與便秘交替、局部腹痛等癥狀，晚期則表現貧血、體重減輕等全身癥狀。其發病率和病死率在消化系統惡性腫瘤中僅次于胃癌、食管癌和原發性肝癌。

我國結直腸癌的發病率和死亡率均保持上升趨勢。2015中國癌癥統計數據顯示我國結直腸癌發病率、死亡率在全部惡性腫瘤中均位居第5位，其中新發病例37.6萬，死亡病例19.1萬。其中，城市地區遠高于農村，且結腸癌的發病率上升顯著。近年來,隨著人民生活水平的不斷提高,飲食習慣和飲食結構的改變以及人口老齡化,我國結直腸癌(colorectalcancer,CRC)的發病率和死亡率均保持上升趨勢。其中,結腸癌的發病率上升尤為顯著。大多數患者發現時已屬于中晚期。結腸直腸癌的早期篩查和診斷對結腸直腸癌的診療工作極為重要。

目前一些基于基于糞便甲基化基因檢測的方法，進行結直腸癌早期篩查，目前已取得成就，證明其可以有效發現結直腸癌及其癌前病變，成功地為結直腸癌的防治提供一項新的技術。但目前可以用于檢測位點仍不夠豐富，檢測位點較為單一。

發明內容

為進一步為結直腸癌診療提供可用的檢測試劑,提高醫療機構結直腸癌診療水平,改善結直腸癌患者預后。

本發明發現了GFRA1基因甲基化與結直腸癌有關。我們發現，ELMO1基因甲基化與結直腸癌有關。我們測定了20例結直腸癌組織中ELMO1基因甲基化情況，結果20例結直腸癌組織中19例存在ELMO1基因甲基化，結直腸癌組織中ELMO1基因甲基化比例為95％。因而認為ELMO1基因甲基化可以作為用于結直腸癌診斷的生物標志物。該試劑盒可以用于結直腸癌診斷的診斷中。

根據本發明的一方面，提供了ELMO1基因甲基化檢測試劑盒,ELMO1基因甲基化檢測試劑盒包含ELMO1基因甲基化特異性引物和ELMO1基因甲基化特異性熒光探針，ELMO1基因甲基化特異性引物為VAV3_F和VAV3_R，

ELMO1_F序列如SEQ ID No.1:5’-GTCGTCGGAGTTTTGATCGTC-3’；

ELMO1_R序列如SEQ ID No.2:5’-CCCCTCCCCTACCGCGCCGA-3’；

ELMO1基因甲基化特異性熒光探針序列如SEQ ID No.3:

5’-AACGAATCGAAACGCGACGCCA-3’。

根據本發明的一方面，提供ELMO1基因甲基化檢測試劑盒還包含內參基因GAPDH基因，的GAPDH基因的GAPDH基因甲基化特異性引物如下：

GAPDH_F序列如SEQ ID No.4：5’-TGGGGTGGTATAGTGGGGTGGTG-3’；