[發明專利]αs1

有效

• 申請號: 201910653868.4
• 申請日: 2019-07-19
• 公開（公告）號: CN110317255B
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發明（設計）人: 叢艷君;呂曉哲
• 申請（專利權）人: 北京工商大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K19/00;C07K16/18;G01N33/68;G01N33/577
• 代理公司: 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙) 11400
• 代理人: 歐陽石文;黃謙

本發明公開了氨基酸序列為SEEIVPNSVEQKHIQKEDVPSER的α_s1?酪蛋白的抗原表位，及其利用該抗原表位制備有效的單克隆抗體，進一步提供利用所述單克隆抗體作為一抗，通過間接競爭ELISA來檢測α_s1?酪蛋白或其水解物過敏原的方法。利用本發明的α_s1?酪蛋白的抗原表位制備的單克隆抗體，通過間接競爭ELISA方法檢測α_s1?酪蛋白為抗原，其檢出限低于為10.49ng/mL，且其檢測方法精確性、重復性較好，能夠有效的用于檢測牛乳過敏原，具有推廣應用價值。

技術領域

本發明涉及生物技術和食品領域，具體而言，涉及α_s1-酪蛋白的抗原表位，及其制備得到的單抗，并利用所述單抗檢測牛乳過敏原的方法。

背景技術

牛乳是一種營養豐富的蛋白制品，同時也是常見的八大過敏物質(蛋類、魚類、甲殼類、奶制品、花生、大豆、堅果、小麥)之一，其致敏性嚴重影響了嬰幼兒的身體健康(MillsE N C,Valovirta E,Madsen C, et al.Information provision for allergicconsumers-where are we going with food allergen labelling？[J].Allergy, 2004,59(12):1262-1268)。牛乳蛋白含量豐富，每升牛乳含有約30-35克蛋白質，含有超過25種不同的蛋白質，理論而言其中的任何一種蛋白質都有潛在致敏性(Martorell-Aragonés A,Echeverría-Zudaire L, Alonso-Lebrero E,et al.Position document:IgE-mediatedcow's milk allergy[J].Allergologia et Immunopathologia,2015,43(5):507-526)。但目前普遍認為酪蛋白(casein，CN)、β-乳球蛋白 (beta-lactoglobulin，β-lg)及α-乳白蛋白(alpha-lactalbumin，α-la)是主要的牛乳過敏原 (Galan-Malo P,López M,Ortiz J,etal.Detection of egg and milk residues on working surfaces by ELISA andlateral flow immunoassay tests[J].Food Control,2017,74:45-53)。乳清蛋白占牛乳蛋白約20％，其中發現α- 乳清蛋白(Bosd4)，β-乳球蛋白(Bosd5)，免疫球蛋白(Bosd7)，牛血清白蛋白(BSA，Bosd6)和痕量的乳鐵蛋白(Bosd lactoferrin)是過敏原。而α-乳白蛋白和β-乳球蛋白是乳清部分最重要的過敏原，占總乳蛋白的5％和10％(Hochwallner H,Schulmeister U,Swoboda I,et al.Cow’s milk allergy:From allergens to new formsof diagnosis,therapy and prevention[J].Methods,2014,66(1):22-33；Docena G H,Fernandez R,Chirdo F G,et al.Identification of casein as the major allergenicand antigenic protein of cow's milk[J].Allergy,1996,51(6):412-416)。酪蛋白大約占牛乳總蛋白的80％，有文獻報道，大約65％的牛乳致敏者都對酪蛋白過敏(王蒙,張汆,賈小麗,等.食物中常見過敏原及其過敏特性[J]. 中國食物與營養,2008(11):62-64)。酪蛋白由α_s1-酪蛋白(32％)，α_s2-酪蛋白(10％)，β-酪蛋白(28％) 和κ-酪蛋白(10％)四種蛋白質組成，其中α_s1-酪蛋白是酪蛋白部分最重要的過敏原，占據牛乳總蛋白的30％以上(Schulmeister U,Hochwallner H,Swoboda I,et al.Cloning,Expression,and Mappingof Allergenic Determinants ofα_s1-Casein,a Major Cow's Milk Allergen[J].TheJournal of Immunology, 2009,182(11):7019-7029)。α_s1-酪蛋白是一條單鏈的磷酸化蛋白質，由199個氨基酸構成，脯氨酸含量較高，沒有二硫鍵，三級結構比較簡單(KumosinskiT F,Brown E M,Farrell H M.Three-Dimensional Molecular Modeling of BovineCaseins:α_s1-Casein[J].Journal of Dairy Science,1991,74(9):2889-2895)。完整的α_s1-酪蛋白或其較大的IgE反應片段是引起過敏反應的原因(Schulmeister U,HochwallnerH,Swoboda I,et al.Cloning, Expression,and Mapping of Allergenic Determinantsofα_s1-Casein,a Major Cow's Milk Allergen[J].The Journal of Immunology,2009,182(11):7019-7029)。