[發(fā)明專利]以氨基苯（磺）酰胺吡啶為功能配基的層析介質(zhì)

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201910653506.5
• 申請日: 2019-07-19
• 公開（公告）號: CN110339829A
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林東強(qiáng);褚文寧;姚善涇
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: B01J20/286
• 分類號: B01J20/286;B01J20/30
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 鄭海峰

本發(fā)明公開了一種以氨基苯(磺)酰胺吡啶為功能配基的層析介質(zhì)。以親水性多孔微球?yàn)閷游龌|(zhì)，層析基質(zhì)中依次加入二甲基亞砜和烯丙基溴進(jìn)行活化；活化的層析基質(zhì)與N?溴代丁二酰亞胺反應(yīng)，進(jìn)行溴代醇化；將溴代醇化后的層析基質(zhì)偶聯(lián)氨基苯(磺)酰胺吡啶配基；最后采用乙醇胺水溶液對未反應(yīng)的溴代醇化末端進(jìn)行封閉，得到以氨基苯(磺)酰胺吡啶為功能基團(tuán)的混合模式層析介質(zhì)。本發(fā)明的新型層析介質(zhì)具有抗體吸附容量大、選擇性高、非鹽依賴吸附的特性，通過改變?nèi)芤簆H至弱酸性即可實(shí)現(xiàn)解吸和回收，制備過程簡便，價(jià)格低廉，可以用于混合模式層析分離抗體。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種以氨基苯(磺)酰胺吡啶為功能配基的層析介質(zhì)，屬于生物化工領(lǐng)域中的蛋白層析分離技術(shù)。

背景技術(shù)

抗體產(chǎn)品往往純度要求較高，同時還必須保持生物活性，因此傳統(tǒng)的分離過程往往難以滿足要求。蛋白A或蛋白G親和層析介質(zhì)能夠特異性結(jié)合抗體，但蛋白類親和配基易被料液中蛋白酶降解脫落，重復(fù)使用次數(shù)低，洗脫較困難，介質(zhì)價(jià)格昂貴，使用成本極高，限制了規(guī)?；瘧?yīng)用。傳統(tǒng)的離子交換層析和疏水相互作用層析等方法雖然能夠結(jié)合抗體，但是特異性和選擇性較差，分離步驟多，純化效果有限。因此，開發(fā)具有抗體選擇性的非蛋白類配基很重要。

目前報(bào)道的針對抗體分離的非蛋白配基較多，有仿生親和配基Ligand 22/8(J.Chromatogr.B 2000，740：1)、多肽配基TG19318(J.Mol.Recognit.1998，11：128)、D2AAG(J.Chromatogr.A 2012，1225：158)和HWRGWV(J.Chromatogr.A 2009，1216：910)等。這些配基往往過于關(guān)注特異性和親和力，造成抗體洗脫條件較為苛刻或者收率較低?；旌夏Ｊ綄游鍪且环N新型的生物分離技術(shù)，配基兼有多種功能基團(tuán)，可以與目標(biāo)蛋白產(chǎn)生疏水和靜電等多種相互作用?；旌夏Ｊ浇橘|(zhì)的配基密度通常較高，吸附容量大，具有耐鹽吸附特性，洗脫條件溫和，特別適合于大規(guī)模的分離純化，已在抗體等蛋白的分離純化中得到應(yīng)用。專利US 8,129,508 B2和AU 2012351751B2利用以巰乙基吡啶為配基的混合模式介質(zhì)MEPHyperCel，從細(xì)胞培養(yǎng)液中分重組蛋白或者抗體。專利US 20050272917A1利用MEPHyperCel從人或牛血漿中分離免疫球蛋白G，純化得到IgG可用于研究、診斷或疾病治療等領(lǐng)域。專利CN 101284224B、專利CN101279244B、CN101279243B、CN104096544B分別公開了以巰乙基吡啶、巰甲基咪唑、巰基苯并咪唑、氨基苯并咪唑?yàn)榕浠奈浇橘|(zhì)及其制備方法。Luo等(J.Chromatogr.A,2018,1533:77)采用填充有ABI-4FF和MMI-4FF介質(zhì)的兩步層析，分離血清中IgM，但是少量HSA也會結(jié)合到層析介質(zhì)，影響分離抗體的純度。Wang等(J.Chromatogr.B,2013,936:33)采用混合模式介質(zhì)Bestarose Diamond MMA、BestaroseDiamond MMC、MEP HyperCel和PPA HyperCel介質(zhì)從模擬血清中分離IgG，其中BestaroseDiamond MMA介質(zhì)同時吸附IgG和HSA，吸附選擇性差；Bestarose Diamond MMC和PPAHyperCel介質(zhì)存在抗體洗脫困難，不利于實(shí)際分離應(yīng)用；MEP HyperCel介質(zhì)主要吸附IgG，但仍結(jié)合少量HSA，IgG的選擇性一般。因此，開發(fā)性能更優(yōu)良的混合模式介質(zhì)，對于抗體的大規(guī)模分離純化有著重要的意義。

混合模式層析的關(guān)鍵是特殊設(shè)計(jì)的、組合多種相互作用的功能配基，針對抗體分離，篩選吡啶類、咪唑類、吲哚類和多芳香環(huán)類等小分子化合物配基庫，進(jìn)行了配基和IgG親和性表征，發(fā)現(xiàn)氨基苯磺酰胺吡啶和氨基苯酰胺吡啶類化合物對IgG親和性高、選擇性強(qiáng)、耐鹽性好，是潛在的抗體分離新型混合模式配基。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種以氨基苯(磺)酰胺吡啶為功能配基的層析介質(zhì)。