[發明專利]一種從自然水體中分離純化衣藻的方法

在審

• 申請號: 201910651424.7
• 申請日: 2019-07-18
• 公開（公告）號: CN110257252A
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發明（設計）人: 王超;杜宛璘;司國輝;葛大艷;賈慧娟;高原;曾艷藝;靳智欣;賴子尼;楊婉玲;李海燕;劉乾甫;彭松耀;麥永湛
• 申請（專利權）人: 中國水產科學研究院珠江水產研究所
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12N1/02;C12R1/89
• 代理公司: 佛山幫專知識產權代理事務所(普通合伙) 44387
• 代理人: 顏春艷

本發明公開了一種從自然水體中分離純化衣藻的方法，包括以下步驟：S1、分別從自然水體中采集水樣本和浮游藻類樣本；S2、將水樣本經微孔濾膜過濾除去雜質，滅菌，作為培養液；S3、將培養液配制成鹽度培養液；S4、將采集的浮游藻類樣本接種到鹽度培養液中，進行培養；S5、觀察鹽度培養液中的衣藻的純化、生長情況直接采用自然水體中的藻群和水體。相對于傳統的分離純化方法，本發明更簡單、直接、準確，說服力更強。特別是針對衣藻作為非優勢藻種的研究，填補了該研究領域的空白。

技術領域

本發明屬于環境生物學領域，特別涉及一種從自然水體中分離純化衣藻的方法。

背景技術

浮游藻類是指在水中營浮游生活的微小藻類，包括藍藻門(Cyanophyta)、綠藻門(Chlorophyta)、硅藻門(Bacillariophyta)、金藻門(Chrysophyta)、黃藻門(Xanthophyta)、甲藻門(Pyrrophyta)、隱藻門(Cryptorhyta)和裸藻門(Euglenophyta)八個門類的浮游種類。浮游藻類是自然水體中的初級生產者，其通過吸收水體中的營養鹽成分，并利用光能驅動光合作用產生有機物促進自身的生長繁殖。自然水體中浮游藻類的生長往往受到來自光照、營養鹽濃度、水溫、攝食壓力、水體流速等外在因素和來自種間競爭的內在因素的共同制約，使浮游藻類存在空間上的分布差異和時間上的演替差異。由于不同微藻的生長特性及其對環境的適應性不同，可以通過改變關鍵環境因子特征達到從自然水體中。

衣藻屬隸屬綠藻門、綠藻綱、團藻目、衣藻科。該屬大多數種類生活于各種各樣的淡水水體中，包括某些被污染的水體；少數是生活于鹽水和海水中，還有少數氣生于潮濕土壤、水池或井口的壁上。

目前國內外有關自然水體中衣藻的生態學研究中，研究人員主要關注衣藻在浮游植物群落結構組成中的出現率和優勢度。利用衣藻開展的實驗室可控試驗中，使用的衣藻往往購買自國內藻種庫，或者將自然水體中的衣藻在顯微鏡下分離，再繼續進行純化培養。這種技術方法的缺點為受制于自然水體中衣藻的初始密度很低，容易在調查伊始便將無法獲取到衣藻的藻種。此外，衣藻的初始密度低導致在顯微鏡下分離挑取衣藻的工作效率很低；此種操作方法，費時費力，分離純化效果不佳。再者，衣藻具有鞭毛可以運動，加大了在顯微鏡下分離挑取的難度。

目前國內外對非優勢藻類的研究較少，一方面由于浮游微藻是自然水體中食物鏈的基礎環節，個體微小，種類繁多，對專業技術人員的要求很高，而目前從業人員相對較少；另一方面，非優勢藻種在自然水體中數量不多，對環境沒有危害，較少受到研究人員的關注。因此，開展此方面的研究，不僅填補了該研究領域的空白，也可對以往的研究結論起到輔助驗證的作用。

發明內容

有鑒于此，本發明所要解決的技術問題，就是提出一種從自然水體中分離純化衣藻的方法。

為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案予以實現：

一種從自然水體中分離純化衣藻的方法，包括以下步驟：

S1、分別從自然水體中采集水樣本和浮游藻類樣本；

S2、將水樣本經微孔濾膜過濾除去雜質，滅菌，作為培養液；

S3、將培養液加入氯化鈉配制成鹽度培養液；

S4、將采集的浮游藻類樣本接種到鹽度培養液中，進行培養；

S5、觀察鹽度培養液中的衣藻的純化、生長情況。浮游藻類樣本經培養后，衣藻在鹽度培養液下其細胞密度呈指數增長，其他微藻死亡消失，判斷為衣藻純化成功；否則，判斷為純化不成功。

作為優選地，本發明中分離純化的衣藻為在總種群細胞豐度中所占百分比小于5％的非優勢藻種。

作為優選地，所述步驟S1中，微孔濾膜的孔徑為0.2μm。

作為優選地，所述步驟S3中，鹽度培養液的鹽度為25‰或30‰。