[發明專利]一種桿狀病毒表達載體

有效

• 申請號: 201910650551.5
• 申請日: 2019-07-18
• 公開（公告）號: CN110387385B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 陳紅英;張瀟月;趙凱霞
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學
• 主分類號: C12N15/866
• 分類號: C12N15/866;C07K14/435
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

本發明公開了一種新型桿狀病毒表達載體，涉及生物技術領域。本發明將桿狀病毒表達載體上四個連續的非必需基因Ac84、Ac85、Ac86和Ac87同時敲除后即獲得所述新型桿狀病毒表達載體。本發明的新型桿狀病毒表達載體使外源蛋白表達水平提高80％。同時病毒的增殖特性不受影響。表達產量的提高能顯著降低企業的生產成本。該桿狀病毒表達載體可用于生物制品工業領域，特別是亞單位疫苗工業領域。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種桿狀病毒表達載體。

背景技術

桿狀病毒是特異感染節肢動物的雙鏈DNA病毒，苜蓿銀紋夜蛾多核型多角體病毒

(Autographa californica nucleopolyhedrovirus ,AcMNPV)是桿狀病毒的模式種。自從1983年Smith GE等首次用桿狀病毒在昆蟲細胞中表達人β-干擾素基因以來(MolCell Biol.1983；3:2156-65 .)，由于具有低成本、高產量，而且具備各種翻譯后修飾系統等優點，桿狀病毒表達載體系統在科研和生產中被廣泛應用，尤其是生物制品和疫苗工業領域。發明內容

然而，相較于工業上普遍使用的原核表達系統(大腸桿菌、枯草芽孢桿菌)和酵母

表達系統，桿狀病毒表達載體系統的產量還不盡人意，這導致桿狀病毒表達系統的生產成本居高不下。

因此，需要研究特定的技術手段以提高上述表達載體系統的產量。

發明內容

有鑒于此，本發明實施例提供了一種桿狀病毒表達載體，主要目的是提高外源蛋白表達產量。

為達到上述目的，本發明主要提供了如下技術方案：

一方面，本發明實施例提供了一種桿狀病毒表達載體，將桿狀病毒AcMNPV表達載體上四個連續的非必需基因Ac84、Ac85、Ac86和Ac87同時敲除后即獲得所述桿狀病毒表達載體。

作為優選，所述Ac84的敲除是指所述Ac84的編碼區被破壞或所述Ac84的啟動子區與其編碼區被同時破壞。

作為優選，所述Ac85的敲除是指所述Ac85的編碼區被破壞或所述Ac85的啟動子區與其編碼區被同時破壞。

作為優選，所述Ac86的敲除是指所述Ac86的編碼區被破壞或所述Ac86的啟動子區與其編碼區被同時破壞。

作為優選，所述Ac87的敲除是指所述Ac87的編碼區被破壞或所述Ac87的啟動子區與其編碼區被同時破壞。

另一方面，本發明提供了一種重組蛋白，用所述桿狀病毒表達載體構建重組病毒，然后感染昆蟲宿主細胞，所述宿主細胞經過培養、增殖并表達為重組蛋白，即獲得所述重組蛋白。

又一方面，本發明提供了所述桿狀病毒表達載體在疫苗工業上的應用。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：

本發明在研究時發現桿狀病毒基因組中存在大量非必需基因，并且一些非必需基因彼此相鄰成簇存在，這些成簇存在的非必需基因(含未知功能基因) 包括Ac84到Ac87連續的四個基因；本發明在同時敲除連續的四個病毒非必需基因Ac84、Ac85、Ac86和Ac87后，發現蛋白表達水平顯著提高、病毒的增殖水平沒有明顯變化，其說明本發明通過上述敲除技術可以提供一個具有優良生產性狀和高產特性的桿狀病毒表達載體。

附圖說明

圖1是本發明的桿狀病毒載體的基因敲除策略示意圖；

圖2是本發明的桿狀病毒載體表達的綠色熒光蛋白GFP全細胞蛋白電泳免疫印跡雜交圖；

圖3是本發明的桿狀病毒載體表達的綠色熒光蛋白GFP總熒光強度柱狀圖；圖4是本發明的桿狀病毒載體的一次生長曲線。