[發明專利]具有抗氧化能力的乳酸菌菌株的篩選方法及應用

有效

• 申請號: 201910647679.6
• 申請日: 2019-07-17
• 公開（公告）號: CN110257302B
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 汪以真;郝麗紅;路則慶;蘇維發;張煜;王成;王鳳芹
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;A23K10/12;A23K10/18;A23K50/30;C12R1/01
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林松海

本發明公開了一株具有抗氧化能力的乳酸菌菌株的篩選方法及應用。所述戊糖片球菌ZJUFA?4，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC NO：16767。該菌株從傳統腌菜中分離得到，經過過氧化氫耐受能力初篩，菌株DPPH自由基、羥自由基以及超氧陰離子自由基清除能力復篩得到。利用該菌株發酵玉米豆粕復合飼料，提高發酵飼料抗氧化酶活性以及抗氧化物質含量，用于提高育肥豬生長性能和抗氧化水平。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及功能性乳酸菌開發與應用領域，特別是一株具有抗氧化能力的乳酸菌及其應用。

背景技術

乳酸菌是一類利用可發酵碳水化合物產生大量乳酸、無芽孢、革蘭氏陽性的細菌總稱，分布廣泛，種類多樣，包括乳酸菌屬、乳球菌屬、鏈球菌屬、片球菌屬等，是一類兼性厭氧微生物。研究表明，乳酸菌具有多種功能，不僅能夠調節機體的免疫系統，維持腸道菌群平衡，還具有一定的抗氧化能力，通過清除自由基使機體保持在相對穩定的狀態，因此具有抗氧化功能的乳酸菌可作為一種天然的抗氧化劑應用到食品、飼料加工等領域中。

近年來，發酵飼料已成為飼料產業發展的新方向。飼料原料經微生物發酵后常含有豐富的益生菌，多種有益代謝產物，如有機酸和可溶性多肽等小分子物質，在生豬養殖方面具有重要作用。

目前已經公開的相關專利方面，CN 107058161 A公開了一株具有抗氧化功能的高加索酸奶乳桿菌JMCC0101、其篩選方法及應用，用于制備益生菌菌粉或乳酸菌飲料；CN105062918 B所公開的是一株具有潛在益生特性的優良乳酸菌新菌株，可以作為調節腸道菌群、改善腸道功能的益生菌，應用于食品、保健品和藥品領域。但是這些專利沒有涉及具有抗氧化特性乳酸菌在發酵飼料中應用，也并沒有從發酵飼料角度出發，研究飼料經微生物發酵前后抗氧化水平的變化。因此，目前還需要開發一種具有抗氧化能力乳酸菌，以及含有它們的發酵飼料，用于提高育肥豬抗氧化水平，對維持人體健康具有重要的應用價值。

本發明通過益生菌發酵玉米豆粕型復合飼料，提高發酵飼料抗氧化水平，用于提高育肥豬生長性能和抗氧化水平。

發明內容

本發明目的在于提供一種具有高抗氧化能力的乳酸菌，以及其在飼料發酵中的應用。

一株具有抗氧化能力的乳酸菌菌株的篩選方法，從傳統腌菜中分離純化得到多株乳酸菌菌株，通過過氧化氫耐受能力初篩，自由基清除能力復篩得到具有抗氧化能力的乳酸菌菌株；

篩選步驟如下：

1）分離純化：從傳統腌菜中分離乳酸菌，并純化得到多株乳酸菌菌株；

2）初篩：檢測步驟1）中得到的乳酸菌菌株過氧化氫耐受能力，初步篩選得到過氧化氫耐受能力較高的乳酸菌菌株；

3）復篩：檢測步驟2）中得到的過氧化氫耐受能力較高的乳酸菌菌株的DPPH自由基、羥自由基以及超氧陰離子自由基清除能力，復篩得到具有抗氧化能力的乳酸菌菌株。

所述的傳統腌菜為東北酸菜，新鮮白菜經清理后放入容器中，加滿涼開水以及適量鹽，用重物壓在最上面，防止白菜漂起，注意不要讓白菜露出水面，防止腐爛，于10-20℃放置20天以上，即可食用。

所述的分離純化：將所述的傳統腌菜倍比稀釋，取10^-3、10^-4、10^-5、10^-6四個稀釋梯度，涂布在MRS平板，每個稀釋梯度至少3個平板，于37℃厭氧培養48h左右獲得單菌落，用接種環挑取單菌落，接種在MRS液體培養基中，24h后，用接種環挑取菌液，在MRS平板上劃線，48h后，MRS平板上單菌落即為所得到純分離的乳酸菌菌株。