[發(fā)明專(zhuān)利]一種用于體內(nèi)雙模態(tài)成像的納米探針及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910640466.0
• 申請(qǐng)日: 2019-07-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN110438137A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-11-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 仰大勇;趙慧婷;趙懷鑫;焦毅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/62
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/62;C12N15/70;C07K19/00;A61K49/00;A61K49/14
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專(zhuān)利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 曹玉平

1.一種用于體內(nèi)雙模態(tài)成像的納米探針的制備方法，包括如下步驟：

(1)融合蛋白(RGD)_n-mRFP1-dLBT的制備：

a.將n個(gè)編碼RGD的核苷酸序列、編碼mRFP1的核苷酸序列、編碼dLBT的核苷酸序列和編碼His標(biāo)簽的核苷酸序列，插入到質(zhì)粒pRSET中得到重組質(zhì)粒，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入到大腸桿菌BL21(DE3)中擴(kuò)大培養(yǎng)，待其生長(zhǎng)繁殖到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，停止培養(yǎng)，加入IPTG誘導(dǎo)劑，使IPTG誘導(dǎo)劑終濃度為0.1-0.4mM，在180-240rpm，20-25℃誘導(dǎo)12-24h；

所述編碼RGD的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，n＝1-10；

所述編碼mRFP1的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述編碼dLBT的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

所述編碼His標(biāo)簽的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示；

所述IPTG為異丙基硫代半乳糖苷的縮寫(xiě)；

b.將步驟a獲得的菌液離心除去上清，沉淀用超純水重懸，離心，沉淀部分用buffer A重懸，然后破碎細(xì)菌，離心，收集上清液；

c.將步驟b得到的上清液用0.45μm濾膜過(guò)濾，將過(guò)濾后的濾液加入到鎳柱中，用bufferA沖洗，當(dāng)測(cè)得流出液中雜蛋白的濃度小于0.01mg/mL時(shí)，用洗脫液洗脫并收集融合蛋白(RGD)_n-mRFP1-dLBT，透析或超濾除去鹽離子，凍干后-80℃保存，融合蛋白(RGD)_n-mRFP1-dLBT簡(jiǎn)稱(chēng)融合蛋白；

(2)融合蛋白上負(fù)載Gd³⁺：

將融合蛋白溶解于HEPES緩沖液，置于截留分子量為7000-14000Da的透析袋內(nèi)，將相當(dāng)于融合蛋白2-5倍摩爾的Gd³⁺加入到透析袋外部的HEPES緩沖液中，透析袋內(nèi)外的HEPES緩沖液濃度一致，在300-600rpm，溫度為20-25℃條件下，反應(yīng)12-20h；將透析袋外部換成不加Gd³⁺的HEPES緩沖液，每隔2-3h換一次透析袋外部的HEPES緩沖液，共透析8-12h，得到用于體內(nèi)雙模態(tài)成像的納米探針。

2.權(quán)利要求1的方法制備的用于體內(nèi)雙模態(tài)成像的納米探針。