[發(fā)明專利]合成香葉醇的谷氨酸棒狀桿菌及構(gòu)建方法及應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910636614.1
• 申請日: 2019-07-15
• 公開（公告）號: CN110438145A
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 盧文玉;徐碩;張傳波;李曼;武玉芬
• 申請（專利權(quán)）人: 天津大學(xué)
• 主分類號: C12N15/77
• 分類號: C12N15/77;C12N1/21;C12P7/04;C12R1/15
• 代理公司: 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201
• 代理人: 曹玉平

1.合成香葉醇的谷氨酸棒狀桿菌的構(gòu)建方法，其特征是包括如下步驟：

將釀酒酵母來源的突變香葉基焦磷酸合成酶基因ERG20^F96W-N127W和截短C端53個氨基酸殘基的纈草來源的香葉醇合成酶基因tVoGES通過融合PCR的方法連接，同源區(qū)加入核糖體結(jié)合位點序列，插入谷氨酸棒狀桿菌表達質(zhì)粒pEC-XK99E的SacI和XbaI酶切位點得到質(zhì)粒1；將質(zhì)粒1轉(zhuǎn)化進入谷氨酸棒狀桿菌，得到合成香葉醇的谷氨酸棒狀桿菌1；

所述釀酒酵母來源的突變香葉基焦磷酸合成酶基因ERG20^F96W-N127W的核苷酸序列用SEQID NO.1所示；

所述截短C端53個氨基酸殘基的纈草來源的香葉醇合成酶基因tVoGES的核苷酸序列用SEQ ID NO.2所示；

ERG20^F96W-N127W和tVoGES間的核糖體結(jié)合位點的核苷酸序列用SEQ ID NO.3所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是還包括如下步驟：

將脫氧木酮糖-5-磷酸合酶基因dxs和異戊烯焦磷酸異構(gòu)酶基因idi通過融合PCR的方法連接，同源區(qū)加入第二種核糖體結(jié)合位點序列，插入到質(zhì)粒pXMJ19的XbaI和SmaI酶切位點，得到質(zhì)粒2；將質(zhì)粒2轉(zhuǎn)化到所述合成香葉醇的谷氨酸棒狀桿菌1中，得到合成香葉醇的谷氨酸棒狀桿菌2。

所述脫氧木酮糖-5-磷酸合酶基因dxs的核苷酸序列用SEQ ID NO.4所示；

所述異戊烯焦磷酸異構(gòu)酶基因idi的核苷酸序列用SEQ ID NO.5所示；

dxs和idi間的第二種核糖體結(jié)合位點的核苷酸序列用SEQ ID NO.6所示。

3.權(quán)利要求1合成香葉醇的谷氨酸棒狀桿菌的構(gòu)建方法構(gòu)建的合成香葉醇的谷氨酸棒狀桿菌1。

4.權(quán)利要求2合成香葉醇的谷氨酸棒狀桿菌的構(gòu)建方法構(gòu)建的合成香葉醇的谷氨酸棒狀桿菌2。

5.權(quán)利要求3的谷氨酸棒狀桿菌1發(fā)酵生產(chǎn)香葉醇的用途。

6.權(quán)利要求4的谷氨酸棒狀桿菌2發(fā)酵生產(chǎn)香葉醇的用途。