[發明專利]基于SSR標記及qPCR檢測枇杷非整倍體分子核型的方法有效
| 申請號： | 201910636117.1 | 申請日： | 2019-07-15 |
| 公開（公告）號： | CN110257548B | 公開（公告）日： | 2020-02-14 |
| 發明（設計）人： | 溫國;黨江波;郭啟高;梁國魯;何橋;蔣朋飛 | 申請（專利權）人： | 西南大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 50209 重慶弘旭專利代理有限責任公司 | 代理人： | 高彬 |
| 地址： | 400716*** | 國省代碼： | 重慶;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 非整倍體 分子核 枇杷 檢測 純合基因型 染色體形態 參考基因 可用 雜合 篩選 | ||
1.一種基于SSR標記及qPCR檢測枇杷非整倍體分子核型的方法，具體包括如下步驟：
(1)采取所檢測材料及其對照材料的嫩葉；
(2)提取基因組DNA，檢測DNA質量；
(3)使用篩選獲得的SSR引物對(2)中基因組DNA進行qPCR檢測，數據處理確認所檢測枇杷非整倍體分子核型；其所用來鑒定枇杷非整倍體分子核型的17對引物是通過枇杷SSR高密度連鎖圖譜篩選而來，具體見下表1：
表1 17對引物
；所述數據處理包括以下步驟：
①通過qPCR的擴增曲線在PCR擴增的指數增長期選取底部、中部、頂部3個CT值；
②在3個CT值分別查看每對SSR引物的PCR產物的量ΔRn1、ΔRn2、ΔRn3，并求出每對SSR引物的ΔRn平均值(ΔRn1+ΔRn2+ΔRn3)/3；
③各連鎖群對應的SSR引物互相作為對照，以其中一對SSR引物的ΔRn平均值對全部SSR引物的ΔRn平均值進行均一化；
④全部SSR引物在對照材料中的ΔRn平均值作為分母進行再次均一化并作為對照，在所檢測材料中的ΔRn除以對照的ΔRn值進行均一化，并與對照比較，依據比較后的差異結合染色體制片結果判斷染色體數目并定位染色體異常所在的連鎖群。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述所檢測材料的ΔRn比值變化情況與其分子核型理論對應關系如下：1為2n,3n,4n核型；0.5為2n-1核型；1.5為2n+1核型；0.67為3n-1核型；1.33為3n+1核型；0.75為4n-1核型；1.25為4n+1核型。
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