[發(fā)明專利]一種基于實時定量PCR對玉米品種抗旱性進行鑒定的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201910634005.2 | 申請日： | 2019-07-15 |
| 公開（公告）號： | CN110184384B | 公開（公告）日： | 2021-04-06 |
| 發(fā)明（設計）人： | 段會軍;崔彥宏;劉松濤;王亞菲;陶勇生 | 申請（專利權）人： | 河北農業(yè)大學 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12Q1/6851 |
| 代理公司： | 北京科億知識產權代理事務所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 李興林 |
| 地址： | 071001 河*** | 國省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 實時 定量 pcr 玉米 品種 抗旱性 進行 鑒定 方法 | ||
1.一種基于實時定量PCR對玉米品種抗旱性進行鑒定的方法，其特征在于，包括以下步驟：
選擇待評價的玉米品種，將其播種于鋪有蛭石的育苗盤中，在玉米植株生長至三葉期進行干旱脅迫處理，同時設置對照組；
干旱脅迫處理7天后，提取玉米植株第一展開葉片的總RNA；
采用實時定量PCR對提取的總RNA中DNAJ基因表達量進行檢測，獲得干旱脅迫DNAJ的表達量以及對照組DNAJ表達量；
計算玉米表達量抗旱指數(shù)DIE，依據(jù)以下公式：
表達量抗旱系數(shù)DCE＝干旱脅迫DNAJ表達量÷對照組DNAJ表達量
DIE＝(表達量抗旱系數(shù)DCE×干旱脅迫DNAJ的表達量)÷所有玉米品種干旱脅迫表達量的平均數(shù)；
依據(jù)玉米表達量抗旱指數(shù)DIE對玉米品種抗旱能力進行評價，其中DIE≥1.3為極抗旱，DIE為1.11～1.19為強抗旱；DIE為0.91～1.10為中等抗旱；DIE為0.71～0.90為弱抗；DIE≤0.70為極弱抗旱。
2.根據(jù)權利要求1所述的基于實時定量PCR對玉米品種抗旱性進行鑒定的方法，其特征在于：所述干旱脅迫是控制育苗盤中蛭石的含水量低于20％。
3.根據(jù)權利要求1所述的基于實時定量PCR對玉米品種抗旱性進行鑒定的方法，其特征在于，采用Trizol試劑提取玉米植株第一片展開葉片的總RNA。
4.根據(jù)權利要求1所述的基于實時定量PCR對玉米品種抗旱性進行鑒定的方法，其特征在于，采用實時熒光定量PCR對提取的總RNA中DNAJ基因表達量進行檢測。
5.根據(jù)權利要求4所述的基于實時定量PCR對玉米品種抗旱性進行鑒定的方法，其特征在于，將提取的總RNA進行逆轉錄成cDNA；然后以cDNA為模板進行實時熒光定量PCR檢測。
6.根據(jù)權利要求5所述的基于實時定量PCR對玉米品種抗旱性進行鑒定的方法，其特征在于，所述實時熒光定量PCR進行檢測時，所采用的反應體系每20μl中包括以下組分：2μl的cDNA模板、0.5μl的正、反引物、10μl的SYBR Green mix熒光染料，7μl無菌水。
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