[發明專利]一種降解蛋白質的產朊假絲酵母單基因表達菌株及其構建方法在審
| 申請號： | 201910633365.0 | 申請日： | 2019-07-12 |
| 公開（公告）號： | CN110305806A | 公開（公告）日： | 2019-10-08 |
| 發明（設計）人： | 劉澤寰;林蔣海;孫濤 | 申請（專利權）人： | 廣東利世康低碳科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/19 | 分類號： | C12N1/19;C12N15/57;C12N15/81;C12R1/72 |
| 代理公司： | 廣州潤禾知識產權代理事務所(普通合伙) 44446 | 代理人： | 鄭永泉 |
| 地址： | 510760 廣東省*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 產朊假絲酵母 表達菌株 單基因 氨基酸 構建 降解 蛋白質 蛋白質分解 蛋白質污染 表達載體 發酵殘液 發酵工程 生物飼料 發酵液 基因組 有機物 羧肽酶 有機肥 整合 制藥 基因 生產 | ||
1.一種降解蛋白質的產朊假絲酵母單基因表達菌株，其特征在于，所述產朊假絲酵母單基因表達菌株為將羧肽酶基因通過產朊假絲酵母表達載體整合至產朊假絲酵母基因組上構建而成。
2.根據權利要求1所述的一種降解蛋白質的產朊假絲酵母單基因表達載體，其特征在于，所述的產朊假絲酵母表達載體為產朊假絲酵母單基因表達載體。
3.根據權利要求1所述的一種降解蛋白質的產朊假絲酵母單基因表達菌株的構建方法，其特征在于，所述產朊假絲酵母表達載體為pcGAPGA。
4.根據權利要求1至3任一項所述的一種降解蛋白質的產朊假絲酵母單基因表達菌株的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1：克隆黑曲霉中的羧肽酶基因；
S2：將上述羧肽酶基因接入產朊假絲酵母表達載體中，構建重組單基因表達載體；
S3：將上述構建得到的重組單基因表達載體用限制性核酸內切酶切割，使之線性化后轉化產朊假絲酵母，構建基因重組產朊假絲酵母單基因表達菌株。
5.根據權利要求4所述的一種降解蛋白質的產朊假絲酵母單基因表達菌株的構建方法，其特征在于，所述步驟S2中包括如下步驟：
S21：將克隆得到的羧肽酶基因進行純化得到pMD19T-pepF克隆載體；
S22：將克隆載體pMD19T-pepF和表達載體pcGAPGA進行雙酶切；
S23：將回收到的羧肽酶目的基因片段與酶切后的pcGAPGA骨架進行連接形成新的質粒pcGAPGA-pepF。
6.根據權利要求4所述的一種降解蛋白質的產朊假絲酵母單基因表達菌株的構建方法，其特征在于，所述步驟S3中的限制性核酸內切酶為ScaI。
7.根據權利要求4所述的一種降解蛋白質的產朊假絲酵母單基因表達菌株的構建方法，其特征在于，步驟S3中所述的轉化是使用電轉化法、冷凍法或化學試劑法進行轉化。
8.根據權利要求5所述的一種降解蛋白質的產朊假絲酵母單基因表達菌株的構建方法，其特征在于，所述步驟S22中，將克隆載體pMD19T-pepF與表達載體pGAPGA同時用XhoI和XbaI兩種內切酶進行雙酶切。
9.根據權利要求4所述的一種降解蛋白質的產朊假絲酵母單基因表達菌株的構建方法，其特征在于，所述步驟S1中的羧肽酶基因為黑曲霉的羧肽酶基因pepF。
10.根據權利要求3所述的一種降解蛋白質的產朊假絲酵母單基因表達菌株的構建方法，其特征在于，所述產朊假絲酵母表達載體為含有CuGAP啟動子或ScTEF1啟動子的產朊假絲酵母表達載體pGAPGA。
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