[發明專利]加德納桿菌、白色念珠菌雙重檢測的引物、探針組、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201910631128.0
• 申請日: 2019-07-12
• 公開（公告）號: CN110283921A
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 鄒國寶;郭光華;藺皓;魏穎穎;劉欣欣;宋高尚;沈江衛;吳茜
• 申請（專利權）人: 中生方政生物技術股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/725;C12R1/01
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 王歡

1.加德納桿菌、白色念珠菌雙重檢測的引物、探針組，其包括：

SEQ ID NO:1～2所示核苷酸序列的引物對，SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探針；和

SEQ ID NO:4～5所示核苷酸序列的引物對，SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探針。

2.根據權利要求1所述的引物、探針組，其特征在于，

SEQ ID NO:3所示核苷酸序列的探針的5’端標記有熒光報告基團CY5，3’端標記有熒光淬滅基團BHQ3；

SEQ ID NO:6所示核苷酸序列的探針的5’端標記有熒光報告基團FAM，3’端標記有熒光淬滅基團BHQ1。

3.加德納桿菌、白色念珠菌雙重檢測的試劑盒，其包括權利要求1或2所述的引物、探針組。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，還包括對內參基因HBB檢測的引物對和探針；

所述針對內參基因HBB檢測的引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO:7～8所示；

所述針對內參基因HBB檢測的探針的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，SEQ ID NO:9所示核苷酸序列的探針的5’端標記有熒光報告基團ROX，3’端標記有熒光淬滅基團BHQ2。

6.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，還包括熒光定量PCR檢測試劑和/或樣本提取試劑；

所述熒光定量PCR檢測試劑包括qPCR Master Mix酶混合液、qPCR Master Mix反應緩沖液；

所述樣本提取試劑包括NaOH、TritonX-100和TE緩沖液。

7.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，還包括陽性對照和/或陰性對照；

本發明的陰性對照品為DEPC水；

本發明的陽性對照品為含有加德納桿菌和白色念珠菌靶基因片段的質粒溶液。

8.檢測并區分加德納桿菌和白色念珠菌的方法，其特征在于，包括：

以權利要求3～7任一項所述的試劑盒，對待測樣品DNA進行實時熒光定量PCR檢測，產生S型擴增曲線則為陽性。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述實時熒光定量PCR的體系包括：

水補足至25μL。

10.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述實時熒光定量PCR的程序包括：

50℃ 2分鐘；

95℃ 5分鐘預變性；

95℃ 15秒→60℃35秒，45個循環。