[發(fā)明專利]豬源雜合抗菌肽PP-1及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910629105.6
• 申請日: 2019-07-12
• 公開（公告）號: CN110283252B
• 公開（公告）日: 2020-04-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 畢重朋;馬清泉;張麗聰;單安山;馮興軍;胡琳琳
• 申請（專利權(quán)）人: 東北農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K38/17;A61P31/04
• 代理公司: 哈爾濱市哈科專利事務(wù)所有限責任公司 23101
• 代理人: 吳振剛

本發(fā)明提供一種豬源雜合抗菌肽PP?1及其制備方法和應(yīng)用，抗菌肽的序列如序列表SEQ ID No.1所示。本發(fā)明以PR?39為目標，截取其片段與豬源骨髓抗菌肽PMAP?23或PMAP?36的片段雜合而獲得氨基酸長度19至22的3條抗菌肽序列；然后使用多肽合成儀，進行固相合成法合成多肽；進行純化，并利用電噴霧質(zhì)譜法進行鑒定；最后，通過最小抑菌濃度和溶血試驗測定衍生抗菌肽的抑菌活性和細胞毒性，篩選具有較理想活性的多肽。本發(fā)明的抗菌肽PP?1安全性較好，具有廣譜抗菌活性、低毒性和低溶血性；該的抗菌肽由19個氨基酸組成，肽鏈較短，制備方法簡單且技術(shù)成熟，合成成本低，適合應(yīng)用于生產(chǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種豬源雜合抗菌肽PP-1及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

傳統(tǒng)抗生素提高了動物的生產(chǎn)性能，降低了疾病發(fā)生率，但同時也導致藥物殘留、耐藥性菌株、環(huán)境污染等問題的產(chǎn)生。特別是近些年來濫用抗生素以及耐藥性問題呈現(xiàn)日益加劇的趨勢，由此可見研發(fā)高效且安全的新型飼料對傳統(tǒng)抗生素進行替代具有重要意義。抗菌肽是生物體天然免疫防御系統(tǒng)的重要組成部分, 不僅具有抑制、殺滅多種細菌、真菌、病毒、寄生蟲的生物學功能，而且可以提高動物機體免疫能力，不存在殘留、無任何副作用。因此，抗菌肽替代抗生素已成為近年來的研究熱點。

豬源抗菌肽種類較多，其中PR-39研究較為廣泛，是一種富含脯氨酸-精氨酸的由39個氨基酸殘基組成的線性內(nèi)源性抗菌肽。但是，其主要對革蘭氏陰性菌具有抗菌作用，對部分革蘭氏陽性菌，比如金黃色葡萄球菌和銅綠加單孢菌等，沒有抑制作用。因此如何拓寬PR-39的抗菌譜具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

基于以上不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種豬源雜合抗菌肽PP-1，其序列如序列表SEQ ID No.1所示，該多肽由豬源抗菌肽PR-39與豬源骨髓抗菌肽 PMAP-23雜合，安全性較好，具有廣譜抗菌活性、低毒性和低溶血性。

本發(fā)明的另外一個目的在于提供一種豬源雜合抗菌肽PP-1的制備方法，該制備方法簡單且技術(shù)成熟，合成成本低，適合應(yīng)用于生產(chǎn)，方法步驟如下：

(1)根據(jù)豬源抗菌肽PR-39的氨基酸組成特點，截取其片段與豬源骨髓抗菌肽PMAP-23或PMAP-36的片段雜合而獲得氨基酸長度19至22的3條雜合抗菌PP-1、PP-2和PP-3，其序列分別如序列表SEQ ID No.1-3所示；

(2)采用固相化學合成法，通過多肽合成儀合成多肽；

(3)將合成的多肽使用反相高效液相色譜進行純化，并利用電噴射質(zhì)譜法對合成的多肽進行鑒定，完成多肽的制備；

(4)采用美國臨床實驗室標準化研究所推薦的測定最小抑菌濃度的方法，發(fā)現(xiàn)雜合抗菌PP-1的最小抑菌濃度平均值為3.56μM，且無溶血毒性，綜合治療指數(shù)達到144，從而選取豬源雜合抗菌肽PP-1。

本發(fā)明的另一目的在于提供如上所述的豬源雜合抗菌肽PP-1的在制備治療革蘭氏陽性菌或/和革蘭氏陰性菌感染性疾病藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的優(yōu)點及有益效果：該多肽由豬源抗菌肽PR-39與豬源骨髓抗菌肽 PMAP-23雜合，安全性較好，具有廣譜抗菌活性、低毒性和低溶血性；該多肽由19個氨基酸組成，肽鏈較短，制備方法簡單且技術(shù)成熟，合成成本低，適合應(yīng)用于生產(chǎn)。

附圖說明

圖1為抗菌肽PP-1的質(zhì)譜圖。

圖2為抗菌肽PP-2的質(zhì)譜圖。

圖3為抗菌肽PP-3的質(zhì)譜圖。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例及附圖對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。

實施例1：豬源雜合抗菌肽的設(shè)計