[發明專利]多甲氧基黃酮提取物在制備抵抗氧化應激產品中的應用

在審

• 申請號: 201910625414.6
• 申請日: 2019-07-11
• 公開（公告）號: CN110237136A
• 公開（公告）日: 2019-09-17
• 發明（設計）人: 孫崇德;王岳;曹錦萍;李鮮;陳昆松
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61K36/752
• 分類號: A61K36/752;A61P39/06;A23L33/105;A61K131/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 趙杭麗

本發明提供多甲氧基黃酮提取物在制備抵抗氧化應激產品中的應用。所述多甲氧基黃酮提取物為甌柑果皮固相萃取后梯度洗脫粉末。甌柑皮的多甲氧基黃酮提取物能夠在人肝L02細胞、人胃GES細胞、人臍靜脈上皮HUVEC細胞、人成纖維WI?38細胞內顯著增加抵御過氧化氫氧化應激損傷的能力，并使得細胞去除多甲氧基黃酮提取物后保持抵御氧化應激損傷能力。可作為功能食品、保健品或防治藥物用于氧化應激損傷相關疾病的防治。

技術領域

本發明屬食品藥品領域，涉及天然來源的甌柑多甲氧基黃酮組分在制備氧化應激功能保護食品、保健品或防治藥物中的應用，尤其涉及甌柑多甲氧基黃酮提取物在人肝L02細胞、人胃GES細胞、人臍靜脈上皮HUVEC細胞、人成纖維WI-38細胞抵抗過氧化氫氧化應激時的應用。

背景技術

氧化和還原是自然界中最常見的化學反應，表現為共價電子對的電子得失或偏移。當生物體內的氧化物積累速率超過生物體還原反應和對氧化物清除速率時，將發生氧化應激損傷。已有研究表明，氧化應激損傷與多種疾病的發生發展相關，包括癌癥、糖尿病、肥胖、神經系統疾病和動脈粥樣硬化等。

天然產物可以幫助機體免受氧化應激損傷的危害，其中大部分為自身具有還原效應的，表現為與活性氧發生反應的“結合型”抗氧化天然活性物質，而可以增強細胞自身抗氧化能力，甚至使得細胞保持這種抵御氧化應激損傷的能力一段時間的天然活性產物，未見報道。

甌柑(Citrus reticulata cv.Suavissima)是蕓香科柑橘屬的一個栽培變種，也是浙江省溫州、麗水地區的傳統特產，已經有兩千多年的栽培歷史。甌柑在民間具有抗腫瘤、祛熱生津、化痰止咳、清涼解毒等特殊食藥功能，這些作用可能與甌柑中富含多甲氧基黃酮類化合物有關。多甲氧基黃酮(Polymethoxylated Flavonoids,PMFs)是指具有4個及4個以上甲氧基取代基的黃酮類化合物，主要來源于蕓香科柑橘屬植物，尤其在柑橘果實的果皮中含量豐富。柑橘果實中的多甲氧基黃酮類化合物在抗腫瘤、抗炎、抗誘變和保護心血管等方面具有很好的活性，關于多甲氧基黃酮的生物活性機制研究也逐漸深入。自1934年首次分離出多甲氧基黃酮類化合物單體以來，人們對其活性進行了大量的研究。近年來研究發現，多甲氧基黃酮類化合物具有抑制癌細胞增殖、抵抗腫瘤侵襲和轉移作用、促進癌細胞凋亡和自噬等生物活性。但是關于甌柑多甲氧基黃酮組分的提高和保持細胞抵抗氧化應激損傷能力的研究，尚未見報道。

發明內容

本發明的目的是提供多甲氧基黃酮提取物在制備抵抗氧化應激產品中的應用。所述多甲氧基黃酮提取物為甌柑果皮的固相萃取(SPE)梯度洗脫粉末。

所述多甲氧基黃酮提取物通過以下方法制備獲得：

(1)甌柑成熟果實，經過挑選果皮無機械損傷和病蟲害的果實，進行果皮和果肉分離，液氮速凍后經過低溫真空干燥，磨樣后得到冷凍干燥粉末。稱取冷凍干燥的甌柑果實果皮粉末用95％乙醇(固液比比1：20)超聲提取三次(25℃)，每次45min，真空抽濾后，合并上清液，在旋轉蒸發儀上蒸干至無乙醇相，溶于去離子水中，得到甌柑果皮提取物水溶液。

(2)取甌柑果皮提取物水溶液約5mL上樣C18固相萃取柱(12cc/2g，Waters)，上樣后固相萃取柱先用去離子水洗脫25倍柱床體積(BV)去掉極性較高的雜質，然后用35％甲醇12BV進行洗脫去掉雜質，然后用100％甲醇3BV洗脫，洗脫流速為1mL/min，收集洗脫液約12mL，洗脫液在旋轉蒸發儀上36℃蒸干得到207.2mg，即為甌柑富含多甲氧基黃酮組分的粉末。

所述產品包括功能食品、保健品或防治藥物。