[發明專利]具有APN抑制作用的生物活性肽

有效

• 申請號: 201910622397.0
• 申請日: 2019-07-02
• 公開（公告）號: CN110372775B
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 趙文竹;張丹;于志鵬;勵建榮
• 申請（專利權）人: 渤海大學
• 主分類號: C07K5/083
• 分類號: C07K5/083;A61P35/00;A61P37/04
• 代理公司: 北京睿陽聯合知識產權代理有限公司 11758
• 代理人: 王瑩;張穎

本發明公開了具有APN抑制作用的生物活性肽，其氨基酸序列分別為Cys?Asn?Arg、Cys?Asp?Arg和Gly?Glu?Phe。本發明經過結構篩選及活性測定證明生物活性肽Cys?Asn?Arg、Cys?Asp?Arg和Gly?Glu?Phe具有APN抑制效果，具有抗腫瘤的潛在活性。同時，生物活性肽Cys?Asn?Arg、Cys?Asp?Arg和Gly?Glu?Phe在體內消化條件下穩定存在，能夠被機體完整吸收利用進而發揮其具有的生物活性，對開發具有抗腫瘤功能的食品、保健品及藥物具有十分重要的意義。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及具有APN抑制作用的生物活性肽。

背景技術

生物活性肽作為促進健康的生物活性成分，能有效促進機體的功能或改善機體的狀態，并具有傳遞生理信息，調節生理功能的作用。生物活性肽常作為功能性成分用于食品生產，特別是在食品、保健品中的應用方面已經取得良好效果。長期以來，雞蛋一直被認為是生物活性肽的理想來源。雞蛋中的生物活性肽在滿足基本的營養需求以外還發揮著多種不同的生物學功能，不僅具有抗氧化、抗衰老、抗炎癥、抗高血壓、降血糖、抗細菌等作用，而且作為免疫調節劑具有調節免疫反應、抗腫瘤等功能，并且能夠清除自由基具有延緩衰老的功效。

雞蛋蛋白被胃蛋白酶和胰蛋白酶分解利用，并發生了一系列生理生化反應，使蛋白質變為多肽或者游離的氨基酸，最終被人體消化吸收或通過小腸上皮細胞的吸收轉運直接進入人體的血液循環，并以活性形式和足夠劑量的方式運輸到靶器官發揮其生物活性作用。

因此，這些生物活性小分子肽不僅是篩選藥物的天然資源寶庫，也是功能性食品工業的主要原料成分。目前，生物活性肽的制備及其應用開發已經成為世界范圍內研究的熱點。天天好生物制品有限公司首次在國內利用酶切技術酶解雞蛋中的卵清蛋白，獲得生物活性肽并證明其生理活性。他們發現，利用胃蛋白酶和胰凝乳蛋白酶水解卵清蛋白，從水解物中得到的氨基酸序列Arg-Ala-Asp-His-Pro-Phe-Leu和Tyr-Ala-Glu-Glu-Arg-Tyr-Pro-Ile-Leu，口服12周能夠使緩激肽的分解減少，加強血管的舒張作用，使血壓下降從而抑制高血壓的發展。1991年，Tsuge等人從雞蛋中的卵清蛋白中得到生物活性肽AHK，VHH和VHHANEN，研究證明它們具有較好的抗氧化生物學活性。Choi等人酶解雞蛋中的卵黃高磷蛋白得到磷酸肽，結果發現不僅對人體具有抗氧化活性，還增強了鈣的生物利用度，增強人體免疫力，減少疾病的發生。

氨肽酶N(APN)是一種鋅依賴性金屬蛋白酶，廣泛存在于如腸上皮，腎，肝，肺細胞等許多細胞中，可以選擇性地從肽的N-末端切割氨基酸。APN經常被鑒定為腫瘤細胞表面的過度表達，并與腫瘤的增殖、侵襲、轉移和血管生成有關，一直被認為是抗腫瘤治療的重要目標。同時，APN與炎癥、鎮痛、癌癥、以及調節血壓都有關。自1976年首次推出抗APN藥物Bestatin以來，已有大量APN抑制劑被報道，例如，Probestin，Lapstatin，AHPA-Val等。

盡管雞蛋蛋白內含有許多具有生物活性的肽序列，但這些生物活性肽序列只有通過一定的手段將其釋放出來才能發揮作用。獲取蛋源性活性肽的主要手段有兩種：①發酵，利用微生物發酵蛋源蛋白獲取；②酶解，利用來自動物的消化道酶和來自植物和微生物的蛋白酶。然而，分離和純化生物活性肽研究周期長且價格昂貴，因此可以通過虛擬篩選的方法來推進這一過程。

發明內容

本發明公開了具有APN抑制作用的生物活性肽，并且可以將其作為保健品成分以及生物藥品中有效成分的生物遞送的有效載體。

本發明的具有APN抑制作用的生物活性肽，其氨基酸序列分別為Cys-Asn-Arg、Cys-Asp-Arg、Gly-Glu-Phe，其抑制APN活性的半抑制濃度(IC₅₀)分別為8.935、6.42和61.67mM。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

(1)生物活性三肽的篩選