[發(fā)明專利]一種基于尿液沉淀煮沸的DNA提取裝置及方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201910616401.2
• 申請日: 2019-07-09
• 公開（公告）號: CN110437983A
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林東旭
• 申請（專利權(quán)）人: 南京格致醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)有限公司
• 主分類號: C12M1/02
• 分類號: C12M1/02;C12M1/00;C12N15/10
• 代理公司: 北京挺立專利事務(wù)所(普通合伙) 11265
• 代理人: 陳列生

本發(fā)明適用于DNA提取技術(shù)領(lǐng)域，提供了一種基于尿液沉淀煮沸的DNA提取方法，包括步驟1：取尿液樣本加入到離心管中，轉(zhuǎn)動(dòng)離心，結(jié)束后小心吸走上方的上清液體丟棄，收集底部的沉淀；步驟2：向離心管中再加入TE緩沖液混勻，轉(zhuǎn)動(dòng)離心，結(jié)束后丟棄上清液，收集沉淀，隨后再次重復(fù)上述步驟2一次；通過在原有的煮沸方案中加入攪拌，通過邊攪拌邊沸水浴加熱，一方面攪拌可以將離心管中的混合的SDS與液體進(jìn)行攪拌混合，使得兩者之間充分的混合，從而增加了SDS對液體的處理成效，提升了在煮沸狀態(tài)下，液體中蛋白質(zhì)變異和DNA的提取效果，同時(shí)邊攪拌邊加熱，提升了加熱的速度，縮短了需要加熱的時(shí)間，增加了整個(gè)加熱的效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于DNA提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種基于尿液沉淀煮沸的DNA提取裝置及方法。

背景技術(shù)

近年來，基因診斷在人類多種腫瘤、疾病的早期診斷、治療以及預(yù)后評估中受到廣泛重視，進(jìn)行基因診斷的首要工作室樣品的采集和DNA樣本的提取。過去采樣的方法主要有兩種：一是傷害性取樣，即獲取病人的病理組織和血液等組織樣本，這種方法會對病人造成疼痛；二是非傷害性取樣，即在不觸及或者不傷害人體本身的情況下，通過收集人的毛發(fā)、糞便、尿液、食物殘?jiān)炔煌问降姆治鰳悠范M(jìn)行DNA的提取和分析診斷。

目前在尿液中提取DNA的沉淀煮沸法中，由于采用沸水對離心管進(jìn)行水浴加熱，但是由于水浴加熱的效率較低，從而使得離心管被加熱耗時(shí)長，致使整個(gè)提取的時(shí)間浪費(fèi)，效率低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種基于尿液沉淀煮沸的DNA提取方法，旨在解決目前在尿液中提取DNA的沉淀煮沸法中，由于采用沸水對離心管進(jìn)行水浴加熱，但是由于水浴加熱的效率較低，從而使得離心管被加熱耗時(shí)長，致使整個(gè)提取的時(shí)間浪費(fèi)，效率低的問題。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種基于尿液沉淀煮沸的DNA提取方法，包括步驟1：取尿液樣本加入到離心管中，轉(zhuǎn)動(dòng)離心，結(jié)束后小心吸走上方的上清液體丟棄，收集底部的沉淀；步驟2：向離心管中再加入TE緩沖液混勻，轉(zhuǎn)動(dòng)離心，結(jié)束后丟棄上清液，收集沉淀，隨后再次重復(fù)上述步驟2一次；步驟3：向其中加入SDS，并水浴中加熱攪拌煮沸，隨后馬上移至冰盒，進(jìn)行降溫；步驟4；待完全降溫后，進(jìn)行轉(zhuǎn)動(dòng)離心并靜置沉淀，取上清液作為PCR反應(yīng)模板。

優(yōu)選的，步驟3中，加熱攪拌煮沸，采用沸水浴加熱，攪拌采用攪拌棒攪拌。

優(yōu)選的，步驟3中，沸水加熱時(shí)間為10min。

優(yōu)選的，步驟1中，尿液取樣為10ml，尿液為患者空腹且取中段尿。

優(yōu)選的，步驟1中，采用eppendorf離心機(jī)，且離心轉(zhuǎn)動(dòng)為10000r到13000r，時(shí)間為10min。

優(yōu)選的，步驟1和步驟2中，離心管管底的沉淀中均會殘留少許尿液。

優(yōu)選的，步驟2中，TE緩沖液設(shè)置為1.5ml，且離心轉(zhuǎn)動(dòng)為10000r到13000r，時(shí)間為5min。

優(yōu)選的，步驟3中，SDS為20μl的l0．3%SDS。

優(yōu)選的，步驟4中，離心在4℃的溫度、離心轉(zhuǎn)動(dòng)為10000r到12000r，離心時(shí)間為10min。

優(yōu)選的，步驟4中，PCR反應(yīng)模板取上清液的2μl。

本發(fā)明還提供一種沉淀煮沸的DNA提取裝置，包括離心器，用以加入反應(yīng)物與尿液樣本進(jìn)行混合沉淀分離；

攪拌器，用以攪拌所述離心器內(nèi)的反應(yīng)物和尿液樣本；

加熱器，用以加熱所述離心器內(nèi)的反應(yīng)物和尿液樣本的混合物；

降溫器，用以對所述加熱器加熱后的反應(yīng)物和尿液樣本的混合物進(jìn)行冷卻。