[發明專利]用于檢測綿羊肺炎支原體的組合物、試劑盒和方法

有效

• 申請號: 201910614546.9
• 申請日: 2019-07-09
• 公開（公告）號: CN110257539B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 李敏;郝秀靜;金華;馬春驥;王玉炯
• 申請（專利權）人: 寧夏大學
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6816;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/35
• 代理公司: 北京北匯律師事務所 11711
• 代理人: 高元吉

本發明公開用于快速檢測綿羊肺炎支原體的組合物、試劑盒和方法。本發明通過設計綿羊肺炎支原體的轉酮醇酶基因的特異性引物、探針，完成了綿羊肺炎支原體的精確檢測。本發明對檢測過程中最佳反應時間與最佳反應溫度、檢測的特異性、敏感性、重復性和穩定性均進行了探索，找到了最佳反應條件，建立了特異性好、敏感性高且可以穩定重復的綿羊肺炎支原體快速檢測方法，具有操作簡單，便捷省時，無需大型的實驗儀器設備，非常適合沒有任何實驗基礎的人員操作，實現現場檢測。

技術領域

本發明涉及分子生物技術領域，具體地涉及一種綿羊肺炎支原體快速檢測的組合物、試劑盒和方法。

背景技術

羊支原體肺炎(Mycoplasma?pneumonia?of?sheep?and?goats，MPSG)是通過空氣、飛沫、飲水等途徑傳播的高接觸性傳染病，主要臨床癥狀有喘氣、咳嗽、高熱、漸進性消瘦和慢性增生性間質性肺炎等。目前已發現的引起羊支原體肺炎的病原菌有綿羊肺炎支原體(Mycoplasma?ovipneumoniae，MO)、山羊支原體山羊亞種(Mycoplasma?capricolumsubsp.capricolum，Mcc)、絲狀支原體山羊亞種(Mycoplasma?mycoides?subsp.capri，Mmc)等，其中MO是常見的致病菌之一，該病在我國廣泛分布和流行，感染率較高，嚴重影響羊養殖業，所以建立準確檢測MO的方法至關重要，對羊支原體肺炎的防控具有重要意義。

目前檢測羊支原體肺炎的方法大致包括以下。培養法是是檢測病原體存在的直接證據，是檢測MO的金標準。一旦檢出，即可確診。可分為一般的固體培養法和快速培養法。然而由于MO生長緩慢，從臨床樣本中初次分離一般需要盲傳2～4代才能通過顯微鏡在固體培養基上看到菌落，需要數日才能得到檢測結果，不僅檢出率低，而且存在耗時過多、中間環節復雜、培養條件要求高等缺陷，給MO的臨床分離帶來了一定的困難，不適合臨床快速診斷。血清學檢測技術具有特異性較高、靈敏度較好、快速、易于操作等優點，非常適合臨床樣本的快速檢查和大規模的流行病學調查，但是支原體肺炎類大多具有共同抗原，容易造成假陽性的實驗結果。免疫組化技術是一門將組織學與免疫學相結合的技術，是在組織細胞原位，通過抗原-抗體特異性結合反應和組織化學顯色反應，借助可見的標記物對相應抗原或抗體進行定位、定性和定量檢測，但對于病情不重或者選擇病灶部位出現偏差較大時，免疫組化則難以檢測到羊支原體的存在。在眾多檢測方法中，多聚酶鏈式反應是簡便且行之有效的檢測方法。PCR法檢測快速、特異性和敏感性高，檢測樣本不需要是活體，不受患者免疫功能、病程、感染程度、有無使用藥物治療及未達到血清檢測水平的影響，使早期診斷和抗生素的正確選擇成為可能。對早期及未生成抗體者及抗體已消失的感染患者有積極的意義；有助于早期診斷，及時治療，并且不存在交叉反應和放射性污染，易標準化。雖然PCR法檢測快速，在某種意義上可替代培養法，但其高敏感性也使PCR法對實驗環境和儀器要求比較高，存在著技術條件要求高、操作復雜、不易普及的問題，一般基層實驗室難以開展，且價格也相對較高。

發明內容

為解決現有技術中的至少部分技術問題，本發明提供一種快速、特異檢測綿羊支原體肺炎的組合物、試劑盒和方法。具體地，本發明包括以下內容：

本發明的第一方面，提供用于檢測綿羊肺炎支原體的組合物，其包括能夠與綿羊肺炎支原體的轉酮醇酶基因選擇性雜交的第一寡核苷酸、第二寡核苷酸和可選的第三寡核苷酸。