[發(fā)明專利]一種單磷酸腺苷保護(hù)的金銀合金納米簇?zé)晒馓结樇捌湓跈z測間日瘧原蟲乳酸脫氫酶中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201910607624.2
• 申請日: 2019-07-05
• 公開（公告）號: CN110408380B
• 公開（公告）日: 2021-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳玉清;張春霞;李洪偉
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號: C09K11/02
• 分類號: C09K11/02;C09K11/58;G01N21/64;B82Y20/00;B82Y30/00
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責(zé)任公司 22201
• 代理人: 劉世純;王恩遠(yuǎn)

一種單磷酸腺苷保護(hù)的金銀合金納米簇?zé)晒馓结樇捌湓跈z測間日瘧原蟲乳酸脫氫酶中的應(yīng)用，屬于熒光探針技術(shù)領(lǐng)域。該熒光探針具有結(jié)構(gòu)簡單、易合成、穩(wěn)定性強(qiáng)、生物兼容性好等優(yōu)點(diǎn)，并能夠?qū)﹂g瘧原蟲乳酸脫氫酶(PvLDH)產(chǎn)生大幅度的線性熒光增強(qiáng)響應(yīng)。該響應(yīng)具有檢測范圍寬(0～1.0×10^?6mol/L)、靈敏度高，其檢測限能夠達(dá)到3.7ng/mL。另外，通過引入輔助劑“Al³⁺”，該探針能夠徹底區(qū)分間瘧原蟲乳酸脫氫酶和其它類型的乳酸脫氫酶。本發(fā)明的檢測方法速度快、操作簡便、信號穩(wěn)定、靈敏度高、無需預(yù)處理，無需復(fù)雜的檢測儀器。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于熒光探針技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種單磷酸腺苷保護(hù)的金銀合金納米簇?zé)晒馓结樇捌湓跈z測間日瘧原蟲乳酸脫氫酶中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

瘧疾是經(jīng)蚊蟲叮咬或輸入帶瘧原蟲患者的血液而感染所引起的蟲媒傳染病，每年會奪走超過43.5萬人的生命(尤其是以5歲以下兒童為主要受害群體)，嚴(yán)重威脅人類健康。據(jù)《2018年世界瘧疾報告》，2017年大約有2.19億瘧疾病例，與前一年相比略有增加。能夠寄生于人體中的瘧原蟲主要有四種，分別是間日瘧原蟲、三日瘧原蟲、惡性瘧原蟲和卵形瘧原蟲，它們是引發(fā)瘧疾的元兇。在瘧疾的早期診斷中，快速診斷試紙法(RDT)是目前最簡單快速的診斷方法，承擔(dān)了全球75％以上的疑似病例檢測。然而，一些研究表明商業(yè)RDT無法準(zhǔn)確檢測低密度寄生蟲(200 寄生蟲/μL)和低抗原濃度(1ng/mL)的患者，導(dǎo)致許多假陰性結(jié)果。因此，開發(fā)新的檢測方法對于瘧疾診斷仍然至關(guān)重要，尤其是開發(fā)成本低、靈敏度高、選擇性好的檢測方法將極大減輕發(fā)展中國家的抗瘧疾負(fù)擔(dān)。

乳酸脫氫酶(LDH)是糖酵解途徑中的末端酶，催化丙酮酸和還原型輔酶I (NADH)轉(zhuǎn)化為乳酸和NAD⁺及其逆過程，廣泛分布于所有活細(xì)胞中(動物，植物和原核生物)。最近研究發(fā)現(xiàn)瘧原蟲乳酸脫氫酶(PLDH)是瘧疾的重要生物標(biāo)志物，其在瘧疾患者血清中具有較高濃度分布(約3～15pg/μL)。因此，研究人員們開發(fā)了一些PLDH生物傳感器，并通過引入單鏈DNA適配體來提高檢測選擇性，但這種適配體的應(yīng)用大幅度提高了檢測成本，限制了該類檢測方法的實(shí)際應(yīng)用。因此以PLDH為靶點(diǎn)的新型檢測方法亟待開發(fā)，尤其是成本低、性能好的探針將對瘧疾診斷和控制至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種單磷酸腺苷保護(hù)的金銀合金納米簇?zé)晒馓结樇捌湓跈z測間日瘧原蟲乳酸脫氫酶中的應(yīng)用。

由于金屬納米簇具有超小尺寸、可控發(fā)射范圍、高穩(wěn)定性和水溶性、良好的生物相容性等優(yōu)良特性，因而在過去十幾年成為納米材料研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。尤其是作為一種新型的熒光團(tuán)，其在化學(xué)檢測及生物標(biāo)記等領(lǐng)域顯示出較高的應(yīng)用前景。本發(fā)明中所述的一種單磷酸腺苷保護(hù)的金銀合金納米簇?zé)晒馓结槪隗w外緩沖溶液中，對間日瘧原蟲乳酸脫氫酶(PvLDH)顯示出高選擇性的熒光增強(qiáng)響應(yīng)，為檢測間日瘧原蟲乳酸脫氫酶(PvLDH)提供了基礎(chǔ)。

本發(fā)明所述的基于單磷酸腺苷保護(hù)的金銀合金納米簇(Au-AgNCs@AMP)熒光探針中，保護(hù)配體分子為單磷酸腺苷(AMP)，它是腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)的兩次水解得到的產(chǎn)物，還可以由肌腺苷酸脫胺酶釋放一組氨基轉(zhuǎn)化而成。此外，AMP 用于食品的苦味遮罩劑，在分解代謝的過程中，可以轉(zhuǎn)化成為尿酸排出體外。因此引入AMP為配體的納米發(fā)光材料具有良好的生物相容性，使其在生物成像、標(biāo)記及傳感等方面存在巨大潛力。

本發(fā)明所述的一種單磷酸腺苷保護(hù)的金銀合金納米簇?zé)晒馓结槪溆扇缦虏襟E制備得到：

(1)利用蒸餾水配制20mmol/L的單磷酸腺苷溶液、10mmol/L的氯金酸溶液、10mmol/L的硝酸銀溶液、500mmol/L的檸檬酸鈉溶液；