[發(fā)明專利]一種檢測人脂蛋白磷脂酶A2底物及其試劑盒

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• 申請日: 2019-07-06
• 公開（公告）號: CN112255409A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發(fā)明（設計）人: 不公告發(fā)明人
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇匯智生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N21/31
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明目的在于提供一種人脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白的反應底物。本發(fā)明另一個目的提供一種檢測人脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白的生化試劑盒。為了實現(xiàn)上述目的本發(fā)明提供了一種用于人脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白的反應底物，本發(fā)明制備了一種底物，將合成的底物1?十二酰基?2（4?硝基苯戊二酰基）磷脂酰膽堿，溶解于TE緩沖液，并加入含硅油的甘油作為穩(wěn)定劑。為了進一步提高底物穩(wěn)定性，本發(fā)明經(jīng)過測試采用三氟丙基甲基硅油。經(jīng)過測試，本配方底物經(jīng)過55℃加速破壞穩(wěn)定性7天，后測試4?硝基苯酚濃度無上升。而加入人脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白后測試4?硝基苯酚濃度反應曲線效能無下降，實現(xiàn)了人脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白的反應底物穩(wěn)定性提升。

技術領域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術領域，具體地說涉及一種檢測人脂蛋白磷脂酶A2底物及其試劑盒。

背景技術

脂蛋白相關磷脂酶A2 （lipoprorein-assoeiated phosPhohPaseA2，Lp-PLA2）又稱血小板活化因子乙酞水解酶（PAF-AH），是一種炎性細胞分泌的能促使氧化磷脂水解的磷脂酶，是磷脂酶A2（PLA2）超家族中的一員，相對分子質(zhì)量為45.4kD（441個氨基酸）。Lp-PLA2的基本功能是催化多種氧化磷脂Sn-2位上酰鍵水解，產(chǎn)生游離脂肪酸和溶血磷脂。此外，Lp-PLA2還能水解血小板活化因子等致炎因子。Lp-PLA2是磷脂酶超家族中的亞型之一，也被稱為是血小板活化因子乙酰水解酶，由血管內(nèi)膜中的巨噬細胞、T細胞和肥大細胞分泌。動脈粥樣硬化斑塊中Lp-PLA2表達上調(diào)，并且在易損斑塊纖維帽的巨噬細胞中強表達。Lp-PLA2可水解氧化低密度脂蛋白ox-LDL中的氧化磷脂，生成脂類促炎物質(zhì)，如溶血卵磷脂和氧化游離脂肪酸，進而產(chǎn)生多種致動脈粥樣硬化作用，包括內(nèi)皮細胞死亡和內(nèi)皮功能異常，刺激粘附因子和細胞因子的產(chǎn)生。這些物質(zhì)可通過趨化炎癥細胞進一步產(chǎn)生自我強化的循環(huán)，生成更多促炎物質(zhì)。Lp-PLA2的檢測有活性法和濃度法兩種。活性法主要采用高效液相色譜法、放射活度測定法和酶水解底物法等。高效液相色譜法靈敏度低，易受到血液中各種成分的干擾。放射活度測定法存在試劑的放射性污染、準確度低、重復性差等問題；酶水解底物法常用的底物以1-癸酞基-2-(4-硝基苯戊二酰基)磷脂酰膽堿、1-豆蔻酰基-2-(4-對硝基苯酚丁二酸酐)磷脂酰膽堿、1-癸酰基-2-(4-硝基苯戊二酰基)磷脂酰膽堿，主要反應都是被脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白水解Sn-2 位產(chǎn)生4-硝基苯戊二酞，4-對硝基苯酚丁二酸酐，由于水解產(chǎn)物不穩(wěn)定進一步分解，產(chǎn)生4-硝基苯酚或?qū)ο趸椒?導至溶液中4-硝基苯酚或?qū)ο趸椒訉ㄩL吸光度發(fā)生變化，目前上述三種底物都存穩(wěn)定性較差的問題，自然分解較快，底物必須獨立的緩沖液體系統(tǒng)保存到用前進行現(xiàn)稀釋現(xiàn)用，否則底物由于自然氧化分解導至本底較高，從而降低檢測效率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于提供一種人脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白的反應底物。

本發(fā)明另一個目的提供一種檢測人脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白的生化試劑盒。

為了實現(xiàn)上述目的本發(fā)明提供了一種用于人脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白的反應底物，本發(fā)明制備了一種底物，將合成的底物1-十二酰基-2（4-硝基苯戊二酰基）磷脂酰膽堿，溶解于TE緩沖液，并加入含硅油的甘油作為穩(wěn)定劑。為了進一步提高底物穩(wěn)定性，本發(fā)明經(jīng)過測試采用三氟丙基甲基硅油。經(jīng)過測試，本配方底物經(jīng)過55℃加速破壞穩(wěn)定性7天，后測試4-硝基苯酚濃度無上升。而加入人脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白后測試4-硝基苯酚濃度反應曲線效能無下降，實現(xiàn)了人脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白的反應底物穩(wěn)定性提升。

本發(fā)明為了更好實施上述方法，公開了一種檢測人脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白的生化試劑盒，該試劑盒包括：稀釋緩沖液R1和為人脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白的反應底物R2。使用前述發(fā)明中底物作為底物，稀釋緩沖液采用pH7.4 磷酸鹽緩沖液并加入0.05%吐溫-20。對于前述試劑盒進一步優(yōu)化增加校準品與質(zhì)控品，校準品與質(zhì)控品的主要成份為人脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白溶液或含人脂蛋白相關磷脂酶A2蛋白的血清。

附圖說明