[發明專利]黃瓜單性結實主效QTL Parth2.1的連鎖分子標記及其應用

有效

• 申請號: 201910605499.1
• 申請日: 2019-07-05
• 公開（公告）號: CN110195125B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 李季;陳勁楓;朱拼玉;婁群峰;錢春桃;虞夏清;程春燕
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11;A01H1/02;A01H1/04
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 傅婷婷;徐冬濤

1.一種篩選含單性結實主效QTL Parth2.1的黃瓜的方法，其特征在于，所述的方法包括：以待選擇材料的DNA作為模板，用分子標記Indel-16Y-46的引物對進行PCR擴增；對擴增產物進行聚丙烯酰胺凝膠電泳分離分析；能擴增出105bp特異條帶的植株為含有黃瓜單性結實主效QTL Parth2.1的植株；所述的分子標記Indel-16Y-46的引物對為：上游引物:SEQID NO.1, 下游引物:SEQ ID NO.2。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法包括：

（1）以待鑒定材料的DNA為模板，用所述的分子標記Indel-16Y-46的引物對進行PCR擴增；PCR擴增反應的總體系為20μl，包括：10×buffer2.0μL，dNTP 2.0μL，正、反向引物各1μL，Taq酶 0.25μL、DNA（10ng）1.0μL，ddH₂O，12.75μL，反應程序為94℃預變性 5min；94℃變性 30s，60℃退火30S，72℃延伸 1 min 20s，35個循環；72℃延伸5min，10℃保存，PCR產物檢測：反應產物在7%的非變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳，用硝酸銀染色；其中所述的buffer含Mg²⁺，Taq酶濃度為5U·μL^-1，DNA濃度為10ng；

（2）標記引物鑒定Parth2.1：能擴增出105bp特異條帶的植株為含有Parth2.1的植株。

3.權利要求1中所述的分子標記Indel-16Y-46在全雌強單性結實黃瓜新品種分子標記輔助育種中的應用。

4.一種全雌強單性結實黃瓜新品種的分子標記輔助育種方法，其特征在于，所述的分子標記輔助育種方法包括以下步驟：

（1）以具有強單性結實性全雌的高代自交系EC1為母本，以無單性結實能力且弱雌性的高代自交系8419為父本，進行雜交得F1，雜種F1自交獲得F2，并繼續通過單粒傳的方式構建F2:4群體，通過套雌花統計單性結實率，從F2:4群體中篩選出單性結實率超過90%的重組單株；

（2）回交及分子標記輔助選擇

分別利用與單性結實主效QTL Parth2.1緊密連鎖的InDel標記InDel-16Y-46和與全雌性狀連鎖的分子標記SA166，從上述篩選出的單性結實率超過90%的單株中進行基因型篩選，選取InDel-16Y-46和SA166均為雜合的單株，具體方法如下：

1）提取單株材料葉片的DNA作為模板，用InDel-16Y-46和SA166分子標記引物進行PCR擴增；

2）PCR產物檢測：反應產物在7%的非變性聚丙烯酰胺凝膠上電泳，用硝酸銀染色；

3）結果判斷InDel標記InDel-16Y-46在無單性結實性的黃瓜材料中擴增出135 bp大小的單一條帶，而在單性結實率超過90%的黃瓜材料中擴增出105bp大小的單一條帶，在強單性結實黃瓜材料與無單性結實性的黃瓜材料雜交F1或者群體中強單性結實性的雜合單株中可以擴出105bp和135bp的兩條帶,SA166標記在全雌黃瓜材料或其他全雌單株中，可以擴增出166bp的條帶，而在非全雌的材料中無條帶擴出；所述的InDel-16Y-46和SA166均為雜合的單株能同時擴增出105bp、135bp和166bp條帶；

所述的與單性結實主效QTL Parth2.1緊密連鎖的分子標記InDel-16Y-46，其上游引物:SEQ ID NO.1, 下游引物:SEQ ID NO.2；分子標記SA166，其上游引物:SEQ ID NO.3, 下游引物:SEQ ID NO.4；

（3）選擇步驟（2）篩選到的InDel-16Y-46和SA166均為雜合的單株中單性結實率超過90%的重組單株與8419進行回交，在回交1代中繼續選擇InDel-16Y-46和SA166均為雜合的單株，與8419進行回交；在回交2代后，繼續選擇InDel-16Y-46和SA166均為雜合的單株進行自交，最后獲得InDel-16Y-46和SA166基因型與EC1帶型一致，而其他染色體區段為8419帶型的單株即為全雌強單性結實的黃瓜新品種。