[發明專利]雞ANXA2基因5′調控區三個突變位點分子標記方法及其在雞育種中的應用

有效

• 申請號: 201910604017.0
• 申請日: 2019-07-05
• 公開（公告）號: CN110343768B
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 姜運良;周文娣;劉根;陳秋月;康麗;郭曉莉;王藝雅
• 申請（專利權）人: 山東農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 薛鵬喜

本發明公開了一種雞ANXA2基因5′調控區三個突變位點分子標記方法及其在雞育種中的應用，涉及分子遺傳學領域。本發明首次發現了雞ANXA2基因5′調控區存在6個突變位點，即?2337(GT??)、?2255(CT)、?2248(AG)、?2188(AG)、?2169(GA)和?2160(AC)位點，其中?2255位點與開產日齡相關，?2188和?2169位點均與開產日齡和產蛋數相關，CAG/TGG基因型的開產日齡顯著早于其他基因型，TGG/TGG基因型的32周產蛋數最多。可見檢測這三個與產蛋性狀相關聯的分子標記，不僅方法簡便快捷，并且有助于選育高產蛋雞品種，為育種工作提供有利的幫助。

技術領域

本發明涉及分子遺傳學技術領域，具體涉及一種雞ANXA2基因5′調控區三個突變位點分子標記方法及其在雞育種中的應用。

背景技術

膜聯蛋白(Annexins)是一種多基因的依賴鈣離子的磷脂結合蛋白超家族。Annexin A2(p36)是Annexins A亞族的成員，是一種多功能蛋白，和該家族的其他成員一樣能以鈣依賴的方式與酸性磷脂結合。ANXA2作為纖溶酶原和組織型纖溶酶原激活物(t-PA)的輔助受體，其復合物可促進血管纖溶；在對內皮細胞活化的反應和PKC調節通路中，AnnexinA2蛋白的N端含有酪氨酸和蘇氨酸的磷酸化位點。Cui et al(2005)研究表明，在豬和大鼠中，ANXA2基因的表達量隨著卵母細胞的成熟和早期胚胎的發育不斷升高，在減數分裂的生發泡期的表達量尤其高。Yang et al(2008)建立了高產蛋率雞品系和低產蛋率雞品系兩個模型相應的cDNA文庫。最后，篩選出包括ANXA2基因在內的4個在高產蛋率雞卵巢中高表達的基因。將ANXA2基因在母雞體內過表達后，也會獲得較高的排卵率。朱桂玉(2014)等通過高通量Illusion/Solexa測序發現ANXA2在白來航雞開產前后卵巢中存在差異。陳欣等(2015)研究發現在F1卵泡中極顯著地高表達，且在膜細胞中的表達量顯著高于顆粒細胞中的表達水平。

分子標記輔助選擇育種，是利用DNA分子標記的方法，在分子水平上進行動物的遺傳改良，避免不確定性因素對遺傳估計的影響。在基因表達過程中，轉錄受5′調控區序列的調控，若堿基發生突變會影響轉錄的起始，最終影響基因的表達。因此，研究雞ANXA2的5′調控區的SNPs，有助于找到有意義的分子標記，為雞的標記輔助選擇育種提供有利的理論依據。

發明內容

針對上述現有技術，本發明的目的是提供一種雞ANXA2基因5′調控區三個突變位點分子標記方法及其在雞育種中的應用。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一方面，提供一種雞ANXA2基因5′調控區與性成熟性狀關聯的突變位點分子標記方法，其具體標記方法是：

采用標記引物P-ANXA2-1，包括：

P-ANXA2-1F，其序列如SEQ ID NO.1所示；

P-ANXA2-1R，其序列如SEQ ID NO.2所示；

擴增雞育種材料的基因組DNA，PCR擴增產物經瓊脂糖凝膠電泳并回收，經測序得到的序列如SEQ ID NO.3所示，結果在ANXA2基因5'調控區(轉錄起始位點為+1)檢測到六個突變位點，即-2337(GT--)、-2255(CT)、-2248(AG)、-2188(AG)、-2169(GA)和-2160(AC)位點，其中-2255(CT)、-2188(AG)和-2169(GA)三個突變位點與雞的開產日齡和產蛋量性狀關聯顯著。