[發(fā)明專利]囊型包蟲病診斷試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201910599363.4
• 申請(qǐng)日: 2019-07-04
• 公開（公告）號(hào): CN110261615B
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫雨;王傳彬;宋曉暉;肖穎;趙曉春;楊林;蔣菲;王睿男;曹麗萍;央珍;王美君;白崇生;李碩;李曉霞;劉林青;曾邦權(quán);王文;肖開提·阿不都克里木;鄒聯(lián)斌;韋正吉;劉健鵬;林漢亮;扎西卓瑪;徐琦;蘇曉慧;劉玉良;畢一鳴;馬英;亢文華;秦菊;薛文;馬曉燕;任娟;李舵;楊天意;孫航
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心（農(nóng)業(yè)農(nóng)村部屠宰技術(shù)中心）
• 主分類號(hào): G01N33/58
• 分類號(hào): G01N33/58
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 任鳳華

本發(fā)明公開了囊型包蟲病診斷試劑盒及其應(yīng)用。該試劑盒包括包被抗原，所述包被抗原由eB2?3偶聯(lián)物和/或eB3?3偶聯(lián)物組成；所述eB2?3偶聯(lián)物是由eB2?3和載體蛋白偶聯(lián)得到的完全抗原；所述eB3?3偶聯(lián)物是由eB3?3和載體蛋白偶聯(lián)得到的完全抗原；所述eB2?3序列1所示的多肽，所述eVP1?2是序列2所示的多肽。試劑盒特異性高、敏感性高，準(zhǔn)確性高，操作簡單、快速，適用于基層各級(jí)獸醫(yī)部門和出入境檢驗(yàn)檢疫局對(duì)細(xì)粒棘球蚴感染血清抗體的快速大量篩選檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及囊型包蟲病診斷試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

包蟲病是棘球蚴病的簡稱，是由棘球絳蟲的幼蟲寄生于人或牛羊體內(nèi)引起的人獸共患寄生蟲病。包蟲病主要由犬和狐貍等犬科動(dòng)物傳播，分為細(xì)粒棘球蚴病、多房棘球蚴病、少節(jié)棘球蚴病和福氏棘球蚴病。我國主要存在由細(xì)粒棘球絳蟲的幼蟲引起的囊型包蟲病(細(xì)粒棘球蚴病)和多房棘球絳蟲的幼蟲引起泡型包蟲病(多房棘球蚴病)，多房棘球蚴病危害嚴(yán)重，致死率高，又被稱為“蟲癌”。

細(xì)粒棘球絳蟲(Echinococcus granulosus)又稱包生絳蟲。成蟲寄生于犬科食肉動(dòng)物，而幼蟲(棘球蚴)主要寄生于人和牛、綿羊等草食動(dòng)物，引起一種嚴(yán)重的人獸共患病，稱為細(xì)粒棘球蚴病。

國內(nèi)外學(xué)者對(duì)篩選細(xì)粒棘球蚴的優(yōu)勢(shì)診斷抗原做了大量的研究，目前主要研究焦點(diǎn)為抗原B(AgB)。抗原B是包蟲病囊液中的一種分子量為120～160kDa的耐熱脂蛋白,具有高度免疫原性,并被認(rèn)為是目前用于免疫診斷試驗(yàn)中具有較高敏感性和特異性的抗原之一。AgB是由數(shù)個(gè)約8kDa的亞基組成的多聚體,免疫印跡顯示其最小亞基(8kDa)是最具有診斷價(jià)值的靶抗原。編碼AgB基因是一個(gè)基因家族,含有AgB1、AgB2、AgB3、AgB4基因。

江莉等利用pET32a載體、pET28a載體和pGEX4T-1載體，表達(dá)我國細(xì)粒棘球絳蟲分離株(新疆源和甘肅源)中克隆的AgB1和AgB2兩個(gè)亞單位基因,結(jié)果表明AgB1在pET28a載體中不能表達(dá),而在pGEX4T-1和pET32a中可表達(dá),但表達(dá)蛋白均為不溶性。AgB2在3種載體中均能表達(dá)，表達(dá)蛋白的溶解性依次為:不溶-部分可溶-可溶。

由于細(xì)粒棘球蚴病具有與多房棘球蚴病具有相似的臨床癥狀，因此需借助實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)對(duì)該病進(jìn)行確診。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的一個(gè)技術(shù)問題是如何高特異性和高靈敏性檢測(cè)細(xì)粒棘球蚴感染抗體以更準(zhǔn)確地診斷細(xì)粒棘球蚴病。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了細(xì)粒棘球蚴病診斷試劑盒或檢測(cè)細(xì)粒棘球蚴抗體(細(xì)粒棘球蚴感染抗體或細(xì)粒棘球蚴病抗體)的試劑盒。

本發(fā)明所提供的細(xì)粒棘球蚴病診斷試劑盒或檢測(cè)細(xì)粒棘球蚴抗體(細(xì)粒棘球蚴感染抗體或細(xì)粒棘球蚴病抗體)的試劑盒，均包括包被抗原，所述包被抗原由eB2-3偶聯(lián)物和/或eB3-3偶聯(lián)物組成；所述eB2-3偶聯(lián)物是由eB2-3和載體蛋白偶聯(lián)得到的完全抗原；所述eB3-3偶聯(lián)物是由eB3-3和載體蛋白偶聯(lián)得到的完全抗原；所述eB2-3是P11、P12或P13的多肽：

所述eB2-3是P11、P12或P13的多肽：

P11、氨基酸序列為序列表中序列1的多肽，

P12、氨基酸序列為序列表中序列1的第2-17位的多肽，

P13、在P12的多肽的氨基末端或羧基末端連接氨基酸殘基以與載體蛋白偶聯(lián)得到的多肽；

所述eB3-3是P21、P22或P23的多肽：

P21、氨基酸序列為序列表中序列2的多肽，

P22、氨基酸序列為序列表中序列2的第2-14位的多肽，

P23、在P22的多肽的氨基末端或羧基末端連接氨基酸殘基以與載體蛋白偶聯(lián)得到的多肽。