[發明專利]一種提升旱稻抗旱能力的功能旱稻生物技術育種方法

在審

• 申請號: 201910599200.6
• 申請日: 2019-07-04
• 公開（公告）號: CN110257432A
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發明（設計）人: 何登驥;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 重慶匯鑫云強實業集團有限公司;重慶歸勝農業科技研究院有限公司;何登驥
• 主分類號: C12N15/87
• 分類號: C12N15/87;A01G22/22;A01H1/02;A01H5/10;A01H6/46
• 代理公司: 北京方圓嘉禾知識產權代理有限公司 11385
• 代理人: 董芙蓉

1.一種提升旱稻抗旱能力的功能旱稻生物技術育種方法，其特征在于，包括下述步驟：

S1：提取巴茅草的DNA,將巴茅草的DNA導入旱稻新品種86-76；

S2：收集步驟S1中旱稻新品種86-76種子種植培育作為供體；

S3：提取供體的DNA；

S4：將供體的DNA導入湘晚秈17號水稻母體；

S5：收集步驟S4湘晚秈17號水稻母體的遠緣雜交種子。

2.根據權利要求1所述的一種提升旱稻抗旱能力的功能旱稻生物技術育種方法，其特征在于，所述步驟S3包括下述步驟：

S31：稱取供體幼苗的第一至第四個嫩葉0.2g，去除表面的DNA污染，置于研缽中與液氮共研成細粉；

S32：將供體細粉轉入2ml離心管中，立即加入1000μl預熱至65℃的CTAB抽提液，于65℃溫育30min，然后常溫混勻；

S33：放至室溫，加入1000μl氯仿/異戊醇抽提勻漿液，使充分混合，于4℃在離心機上以10000r/min轉速離心5min；

S34：將上清液轉移至新的離心管中，加入1/10體積的65℃的CTAB/NaCl溶液，充分混勻；

S35：再次加入1000μl的氯仿/異戊醇，充分混合，于4℃在離心機上以10000r/min離心5min，抽提至上清液澄清；

S36：將上清液轉移至新的離心管中，加入1000μl CTAB沉淀液，混勻，室溫放置15min后，于4℃10000r/min離心5min，棄上清；

S37：加入200μl的高鹽TE緩沖液和2μlRNaseA儲備液重懸沉淀，于37℃溫育30min；

S38：加入2000μl預冷的無水乙醇，混勻，于4℃在離心機上以10000r/min離心15min；

S39：將沉淀用70％乙醇清洗兩次后，晾干，加入50μlTE溶解沉淀。

3.根據權利要求1所述的一種提升旱稻抗旱能力的功能旱稻生物技術育種方法，其特征在于，所述步驟S4還包括下述步驟：

S41：在母體水稻開花后3小時，將穎殼剪掉三分之一；

S42：去掉穎殼內雄花和已經開過的或未開過的花朵，保留正在開的花朵；

S43：將供體DNA導入穎殼內，然后套袋。

4.根據權利要求1所述的一種提升旱稻抗旱能力的功能旱稻生物技術育種方法，其特征在于，所述步驟S5后還包括步驟S6，將步驟S5中收集的遠緣雜交種子選育七代后獲得生長穩定的新品系種子。